[發明專利]一種鴨沙門氏菌減毒疫苗的制備方法

在審

• 申請號: 201811276193.8
• 申請日: 2018-10-30
• 公開（公告）號: CN109331178A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 魏志剛;劉應鵬
• 申請（專利權）人: 河南后羿實業集團有限公司
• 主分類號: A61K39/112
• 分類號: A61K39/112;A61P31/04
• 代理公司: 鄭州中原專利事務所有限公司 41109
• 代理人: 張春;王曉麗

一種鴨沙門氏菌減毒疫苗的制備方法，包括以下步驟，a、從易感染沙門氏菌的養鴨場內選取感染沙門氏菌的病變鴨子，分離出原始菌株SC26；b、分別經紫外、亞硝基胍誘變原始菌株SC26，獲得各自最佳誘變條件，最佳誘變條件下細菌死亡率為80～90%左右，然后以各自最佳誘變條件進行紫外—亞硝基胍復合誘變，得到減弱的誘變菌株SC2261；c、將減弱的誘變菌株SC261擴大培養，制備沙門氏菌減毒疫苗。發明提供的鴨沙門氏菌減毒疫苗的制備方法，取發病區當地菌株，免疫原性針對性強，臨床效果好，相當于專場專項疫苗。

技術領域

本發明屬于動物細菌減毒疫苗領域，具體涉及一種鴨沙門氏菌減毒疫苗的制備方法。

背景技術

沙門氏菌是腸桿菌科成員，超過2500個血清型，在自然界分布廣泛，幾乎所有動物都能發生感染，因為血清型眾多，不同動物的感染譜不一樣，這給沙門氏菌病的防控帶來了很大困難。

要成功擺脫沙門氏菌的困擾，需從整條生產鏈上各個環節實施防控，即所謂從農場到餐桌，當中主要涉及到飼料工業、養殖場和屠宰加工三個環節，降低畜禽的沙門氏菌感染率被認為是減少畜禽產品沙門氏菌污染的重要措施，除了控制飼料與水源的污染、維持良好的衛生環境、防止老鼠、野鳥傳播等基本的衛生和生物安全措施外，使用疫苗可以有效地降低畜禽的沙門氏菌感染率，特別是在沙門氏菌流行率高養殖地區，因為疫苗在一定程度上可以阻止或減少沙門氏菌在腸道定殖，從而降低糞便的排毒量或蛋殼的污染率，還可以降低沙門氏菌在生殖組織的定殖以減少垂直傳播，某些血清型如雞白痢沙門氏菌和馬流產沙門氏菌，很容易感染生殖道并在生殖道定殖。

雖然滅活苗和活疫苗都能夠減少動物沙門氏菌的感染率和降低其排毒量，但大量研究表明活疫苗比滅活苗能更有效抵御沙門氏菌的感染，原因在于活疫苗可以同時激活體液免疫和細胞免疫，且能夠更好誘導Th1反應，這對胞內菌的免疫清除起重要的作用，同時由于沙門氏菌主要通過消化道侵入機體，這對阻止沙門氏菌入侵腸道起到重要作用。由于活疫苗有其它疫苗無可比擬的優勢，長期以來，研究者致力于研制安全有效而又遺傳穩定的沙門氏菌弱毒株，探索出各種人工致弱的方法，研制出多種安全有效的沙門氏菌弱毒菌株，由于血清型眾多，交叉免疫效果不強，故當地采集病原誘變減毒疫苗，制備減毒疫苗能安全有效的防治養殖場沙門氏菌病。

發明內容

針對上述防治禽類特別是鴨養殖場沙門氏菌感染的問題，本發明的目的是提供能夠很好預防養殖場沙門氏菌感染的減毒疫苗的制備方法。

本發明的技術方案具體為：

一種鴨沙門氏菌減毒疫苗的制備方法，包括以下步驟，

a、從易感染沙門氏菌的養鴨場內選取感染沙門氏菌的病變鴨子，分離出原始菌株；

b、分別經紫外、亞硝基胍誘變原始菌株，獲得各自最佳誘變條件，最佳誘變條件下細菌死亡率為80～90%左右，然后以各自最佳誘變條件進行紫外—亞硝基胍復合誘變，得到減弱的誘變菌株；

c、將減弱的誘變菌株擴大培養，制備沙門氏菌減毒疫苗。

所述步驟b具體步驟為，

（1）取感染沙門氏菌的病變鴨子，解剖取病變組織，接種普通LB固體培養基，37℃培養箱中培養18-24h，挑取LB固體培養基長出的圓形邊緣整齊,表面光滑,半透明,小凸起的菌落，分別接種于沙門氏菌顯色培養基和DHL沙門氏菌鑒定培養基，選擇在沙門氏菌顯色培養基上顯淡紫色、同時在DHL沙門氏菌鑒定培養基上顯黑色的菌株，傳代純化后，擴大培養，細菌計數后用生理鹽水配制成1×10⁸ - 5×10⁸ CFU/ml的原始菌株菌懸液，保存備用；