[發(fā)明專利]一種檢測人類HTLV病毒（1＋2）型抗體的試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811275366.4
• 申請日: 2018-10-30
• 公開（公告）號: CN109187954A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設計）人: 吳文娟;王新明;孫馮博;劉功成;付光宇;吳學煒
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/543;G01N33/569;G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

本發(fā)明公開了一種檢測人類HTLV病毒（1＋2）型抗體的試劑盒，包括磁微粒包被混懸液，酶結合物工作液和樣本稀釋液；所述包被抗原為HTLV（1+2）融合抗原；所述酶結合物為以辣根過氧化物酶標記的HTLV（1+2）融合抗原。本發(fā)明試劑盒采用磁微粒作為固相載體，具有較大的比表面積，能夠增大免疫反應發(fā)生面積，提高反應的靈敏度；磁微粒球形和均一的表面減少了化學性粘附和非特異性結合，提高了特異性酶促化學發(fā)光系統(tǒng)，實現(xiàn)對反應信號的有效放大。本發(fā)明試劑盒特異性好，使抗原和抗體都達到了很高的檢出靈敏度，實現(xiàn)了全自動測定。本發(fā)明試劑盒可配合全自動化學發(fā)光儀使用，降低了人為操作對測試結果的影響，使檢測結果更可靠、準確、快速，更具有可重復性。

技術領域

本發(fā)明涉及磁微粒檢測技術，尤其是涉及一種利用磁微粒技術檢測人類HTLV病毒（1＋2）型抗體的試劑盒。

背景技術

人類T淋巴細胞白血病病毒(human T-lymphotropic virus,HTLV)是最早發(fā)現(xiàn)的人類逆轉錄病毒，主要包括四種亞型，其中HTLV-1和HTLV-2二者的基因水平70%同源。輸血傳播HTLV-1/2主要引起HTLV-1/2相關脊髓病、熱帶痙攣性下肢輕癱(TSP)和脊髓病( HAM)。感染一般無任何癥狀，且存在親密接觸者傳播；輸血感染HTLV-1潛伏期較短，可在輸注被感染的血液后1個月～4個月發(fā)病，而自然感染者通常在數(shù)年甚至數(shù)十年發(fā)病。

為確保血液安全，預防HTLV-1/2經(jīng)輸血傳播， 日本于1986 年開始對獻血者增加HTLV-1/2的常規(guī)檢測，美國于1988 年開始對獻血者增加HTLV-1/2的檢測，韓國則于2009年4月起全面實行獻血者的HTLV- 1篩查。目前國際上已有日本、美國、加拿大、法國、巴西、韓國和我國的香港、臺灣等國家和地區(qū)將HTLV-1/2列入獻血者常規(guī)篩查項目。近年來，有關HTLV-1/2所致疾病及各地區(qū)獻血者的HTLV-1/2感染情況越來越受到學者的關注，各地區(qū)也對當?shù)孬I血者的HTLV-1/2感染情況做了不少研究。目前美國估計輸血傳播HTLV-1的風險為1/64.1萬，法國為1/600萬，加拿大為1/430萬。

HTLV- 1基因高度保守，不同分離株之間的同源性在91%～100%，主要包括4種基因型 HTLV- 1A( Cosmopolitan)、-1B( Central African)、-1C( Melanesian)及-1D(Pygmies) ; HTLV- 1A又含3個主要亞群：世界人種亞群(Transcontinental)、西非人種亞群(West African)和日本人種亞群(Japanese)。已有的HTLV-1分型方法大都基于LTR、gp21或部分gp46 基因，Capdepont等利用94株env(gp46+gp21)全長序列所做的同源性分析發(fā)現(xiàn)，通過對env全長序列的同源性比對進行HTLV- 1基因分型，比用LTR的序列要更細致準確，而gp46區(qū)域集中了env基因全長差異位點中的65. 9%。

現(xiàn)有檢測該病毒的方法主要有：

1、HTLV核酸的檢測：核酸的檢出是HTLV 感染最直接證據(jù)，通過PCR 和核酸雜交的方法進行。PCR 主要用于檢測標本中整合的病毒基因序列，如病毒基因兩端的長末端重復序列（LTR）、外膜蛋白（env）、gag、pol 和tax 序列等，設計不同的引物和探針可對HTLV-Ⅰ/Ⅱ不同亞型進行鑒定，HTLV感染后病毒基因在細胞內(nèi)的整合形式?jīng)Q定了PCR 引物的選擇， 一般采用兩種不同的基因引物， 其中應包括LTR 和/或env。PCR 靈敏度和特異性都較高，常用于其它HTLV-Ⅰ/Ⅱ檢測方法的評價，但PCR 的操作復雜、成本高，且容易污染出現(xiàn)假陽性，不適于常規(guī)使用。因此目前多用于HTLV 感染的確證試驗，而不適于作為篩檢試劑。另外，由于HTLV 感染者極少出現(xiàn)病毒血癥，因此PCR 不能用于庫存血清的檢測。

2、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和明膠顆粒凝集法（PA）：這是HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測的初篩試驗，采用最多的抗原是gp46、p2le、p24 和p40tax，該方法敏感性高，但特異性較低，適用于大規(guī)模的初篩鑒定。這種方法相對于PCR操作相對簡單一些，成本較低。