[發明專利]一種基于SIM靶點抗KSHV/EBV相關腫瘤小分子化合物篩選方法和應用

在審

• 申請號: 201811272245.4
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN111100902A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 蔡啟良;丁玲;朱青;王玉燕
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;A61K31/565;A61K31/704;A61K31/436;A61K31/352;A61K31/122;A61K38/16;A61P31/22;A61P35/00
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發明屬于基因工程技術領域，涉及了篩選抗皰疹病毒相關腫瘤的小分子化合物的方法。該方法包括如下步驟：(1)建立LANA與SUMO2蛋白互作系統；(2)利用上述蛋白互作系統，在細胞水平標準化合物篩選；所述的LANA與SUMO2蛋白互作系統是帶標簽的LANA1?329(LANA1?329ΔSIM1+2)與帶互補標簽的SUMO?2(ΔGG)。本發明還包括用上述方法篩選獲得的化合物的應用，以及使用這些化合物抑制皰疹病毒的方法。這些化合物經體內外試驗證明其對皰疹病毒及皰疹病毒感染陽性腫瘤細胞的具有不同程度地靶向殺傷效果，有效性可達nM級，有望用于臨床預防和治療皰疹病毒相關疾病。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，尤其是涉及一種抗KSHV/EBV相關腫瘤的小分子化合物 及其篩選和應用。

背景技術

卡波氏肉瘤病毒(Kaposi’s sarcoma-associated Herpesvirus，KSHV)，又稱人類皰 疹病毒8型(HHV-8)，于1994年由Chang和Moore發現并鑒定^[1]，作為一種腫瘤病毒，是 多種人類惡性腫瘤的主要病原體，與卡波氏肉瘤(Kaposi’s Sarcoma，KS)、原發滲出性 淋巴瘤(Primary Effusion Lymphoma，PEL)以及多中心性Castleman病(MulticentricCastleman’s disease，MCD)發生相關^[2-4]。卡波氏肉瘤也是艾滋病患者在HIV滴度得到控制的情況下發生死亡的主要病因之一^[5]，原發滲出性淋巴瘤目前尚無最佳治療方案且預后很 差，平均生存時間僅為6個月左右^[4]，更重要的是，目前尚未建立針對KSHV引發惡性腫瘤的治療方法或疫苗，因此，KSHV相關腫瘤的治療尚需尋求更有效的新思路及方法。

眾所周知，KSHV生活周期包括潛伏(latency)和裂解復制(lytic replication)兩個感染階段，在原發感染初期，潛伏期和裂解復制期基因均有表達，經過幾輪的復制，裂 解期基因表達降低，僅少數潛伏期相關毒基因表達，如ORF73(LANA)、ORF72(vCyclinD)、 K12(Kaposin)和K13(vFLIP)，主要負責病毒附加體維持、復制和宿主細胞轉化。其中LANA 發揮著重要的功能：以C端連接KSHV環形的附加體(episome)DNA，N端結合于宿主細胞 的染色質，形成病毒基因組存在模式，隨著宿主細胞增殖分裂而潛伏復制的獨特方式^[6]。KSHV 生活周期如圖1所示。

SUMO(Small ubiquitin-like modifier)具有與泛素分子(Ubiquitin)相近的分子 量和相似修飾環，故而屬于類泛素分子家族^[7]。在哺乳類動物細胞中目前發現至少有四類 SUMO成亞型：SUMO-1，SUMO-2，SUMO-3和SUMO-4。其中，SUMO-1只能形成單個SUMO修飾，SUMO-2和SUMO-3高度同源，序列一致性高達97％，可形成多聚SUMO修飾；而SUMO-4具有 組織特異性(主要表達于胰臟)，且功能尚不清楚^[8]。

與泛素分子相似，SUMO信號可被一類SUMO互作多肽基序(SUMO-interactingmotif) 識別結合，目前認為有三種較為肯定的保守基序分別為：K-X3- 5-I/V-I/L-I/L-X3-D/E/Q/N-D/E-D/E、h-h-x-S-x-S/T-a-a和V/I-x-V/I-V/I^[9-11]。我們課 題組前期的工作發現，LANA蛋白的N端有2個串聯的SIM基序(SUMO-interacting motif)， 可招募包括多聚SUMO2化修飾的KAP1和sin3A在內的多種蛋白，形成轉錄抑制復合體，促 進KSHV基因沉默和維持附加體的穩定傳代，當LANA蛋白N端的2個SIM位點發生突變， KSHV基因組穩定性喪失^[12]。該研究提出，LANA是通過被一種具有分子開關功能的因子SUMO2 修飾，完成對KSHV病毒維持潛伏感染狀態的調節，且潛伏期LANA蛋白的SIM位點是有效 消除KSHV潛伏感染的潛在靶點。