[發明專利]枯草芽孢桿菌分離株和其用途

在審

• 申請號: 201811270606.1
• 申請日: 2018-10-29
• 公開（公告）號: CN110872567A
• 公開（公告）日: 2020-03-10
• 發明（設計）人: 陳彥霖;葉怡真;廖巧敏;林玟繽
• 申請（專利權）人: 財團法人食品工業發展研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P1/04;A61K35/742;A61P29/00;A61P19/02;A23L33/135;C12R1/125
• 代理公司: 北京律盟知識產權代理有限責任公司 11287
• 代理人: 林彥

1.一種枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)分離株，其是寄存于萊布尼茨研究所DSMZ-德國微生物和細胞培養保藏中心且寄存編號為DSM32867或DSM32870的菌株，或是與寄存于萊布尼茨研究所DSMZ-德國微生物和細胞培養保藏中心所且寄存編號為DSM32867或DSM32870的菌株具有基本上完全相同特征的變異株。

2.一種制備枯草芽孢桿菌發酵提取物的方法，其包含：

(a)將根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌分離株接種于培養基中；

(b)在適當環境下培養所述經接種的培養基以獲得發酵物；

(c)從所述發酵物中去除所述枯草芽孢桿菌菌株以獲得上清液；

(d)將所述上清液以體積比為約1:1至約1:9的比例與100％乙醇混合以產生沉淀物；和

(e)收集所述沉淀物。

3.根據權利要求2所述的方法，其中步驟(a)中的接種量為每克培養基接種約10⁷CFU至約10¹⁰CFU的所述分離株。

4.根據權利要求2或3所述的方法，在步驟(b)中，所述經接種的培養基是在含氧下培養于約20℃至約40℃的溫度中。

5.根據權利要求2或3所述的方法，在步驟(d)中，所述上清液與100％乙醇的混合體積比為約1:4。

6.根據權利要求2或3所述的方法，其中更包含：

(f)干燥所述沉淀物。

7.根據權利要求6所述的方法，其中更包含：

(g)將所述沉淀物溶入適當的溶劑中。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述溶劑為磷酸鹽緩沖劑、醋酸緩沖劑、鹽酸緩沖劑或純水。

9.一種枯草芽孢桿菌發酵提取物，其可由根據權利要求2至8中任一權利要求所述的方法獲得。

10.根據權利要求9所述的枯草芽孢桿菌發酵提取物，當其利用高效液相色譜(highperformance liquid chromatography)在以下條件下測定時，在滯留時間為約2.73min、約2.97min、約3.23min和約5.86min下分別具有4個主要峰：

HPLC機型：沃特世(Water)2695分離模塊

檢測器：沃特世2996光電二極管陣列檢測器

柱：RP-18(100，5μm，默克(Merck))

流速：0.5mL/min

流動相：0.005M戊烷磺酸鈉(sodium pentanesulfonate)溶液/乙腈(acetonitrile)，95:5(v/v)

測定波長：258nm

注射體積：10μL

分析時間：10min。

11.一種組合物，其包含治療有效量的根據權利要求9或10所述的枯草芽孢桿菌發酵提取物。

12.根據權利要求11所述的組合物，其是食品組合物或醫藥組合物。

13.一種根據權利要求9或10所述的枯草芽孢桿菌發酵提取物的用途，其是用于制備促進軟骨細胞再生的藥物。

14.一種根據權利要求9或10所述的枯草芽孢桿菌發酵提取物的用途，其是用于制備增加軟骨細胞外間質分泌的藥物。

15.一種根據權利要求9或10所述的枯草芽孢桿菌發酵提取物的用途，其是用于制備治療關節炎的藥物。