[發明專利]一種區分雙孢蘑菇4個主栽品種的SSR-PCR鑒定方法

有效

• 申請號: 201811269851.0
• 申請日: 2018-10-29
• 公開（公告）號: CN109207625B
• 公開（公告）日: 2022-01-04
• 發明（設計）人: 蔡志欣;陳美元;廖劍華;郭仲杰;盧園萍;施肖堃;王澤生
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院食用菌研究所（福建省蘑菇菌種研究推廣站）
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明屬于食用菌分子標記輔助育種領域，具體涉及一種區分雙孢蘑菇4個主栽品種的SSR?PCR鑒定方法。該方法利用SSR分子標記對雙孢蘑菇國內主栽品種As2796、W192、福蘑38和A15進行PCR特異擴增，產生特異性圖譜。本發明的方法不用冗雜的農藝性狀出菇對比試驗，特異性的擴增圖譜能夠鑒別區分雙孢蘑菇國內的主栽品種，該方法耗時短，操作簡便，特異性強，該方法可以在雙孢蘑菇菌種生產中快速地鑒別國內的4個雙孢蘑菇主栽品種，避免了同種異名和同名異種現象的發生，提高了雙孢蘑菇的生產效率。

技術領域

本發明屬于食用菌分子標記輔助育種領域，一種區分雙孢蘑菇4個主栽品種As2796、W192、福蘑38和A15的SSR-PCR鑒定方法。

背景技術

簡單序列重復(simple sequence repeat, SSR) ,又稱微衛星DNA，是以2-6個堿基為重復基元的串聯重復序列，廣泛存在于高等生物的基因組中。在眾多的分子標記方法中，基于基因組的SSR標記具有特異位點眾多、共顯性、復等位、分布廣泛等特點，目前已成為構建連鎖遺傳圖譜、研究群體遺傳學、繪制品種指紋圖譜、篩選個體特異譜帶以及分子標記輔助育種等的理想工具。

雙孢蘑菇(Agaricus bisporus)是世界上栽培最為廣泛的食用菌, 具有非常重要的經濟價值。在中國，雙孢蘑菇也廣泛種植，據2016年官方統計全國雙孢蘑菇年產量338萬噸，占世界總產量的60%以上，目前已成為農業中的新興支撐產業。由于我國各地區的生產力發展不平衡，種植雙孢蘑菇的生產方式也是呈現出多樣化，有全套引進荷蘭模式的全機械化的工廠化種植方式，也有經過改良的適合中國本土國情的國內機械化生產方式，還有數量眾多的以個體農戶為主的小生產作坊。目前，流通于國內的雙孢蘑菇主栽品種有As2796、W192、福蘑38和A15，根據國家食用菌產業技術體系雙孢蘑菇品種改良崗位調研結果，上述4個主栽品種使用比例占90%以上。其中As2796出菇潮次多，耐粗放管理，較適合小生產作坊種植；W192和福蘑38產量高，質量較好，出菇較集中，適合改良式的中國工廠化種植；A15產量高，質量中等，出菇集中，適合荷蘭模式的全機械化的工廠化種植方式。由于不同的種植方式要求與之相適應的品種種性和栽培管理粗放性也不同，所以在雙孢蘑菇生產過程中對菌種真實性的要求非常高。但是由于雙孢蘑菇可以無性繁殖，部分農戶和企業種植戶經常通過組織分離，不規范地擴繁和保種，造成了生產經營和管理流通的過程中經常出現了同種異名和同名異種的現象，所以非常有必要對國內的主栽品種建立一套快速鑒別的方法。

2013年到2016年期間我所承擔了國家科技支撐計劃項目子課題“雙孢蘑菇新品種培育及制種關鍵技術研究”，通過SSR分子標記技術對國內外的雙孢蘑菇栽培菌株進行遺傳多態性分析并建立遺傳親緣關系圖譜。近期，我們在該課題的研究基礎上經多次實驗探索，開發獲得了一組鑒別雙孢蘑菇As2796、W192、福蘑38和A15的SSR-PCR鑒定方法，利用該分子標記能在菌株的菌絲階段進行快速地鑒別，無需通過出菇根據農藝性狀來判定，省時省力，這對雙孢蘑菇生產過程中菌種或品種的真實性鑒定有著重要的意義。

發明內容

本發明基于分子標記技術，提供一種區分雙孢蘑菇4個主栽品種的SSR-PCR鑒定方法。

本發明的一種區分雙孢蘑菇4個主栽品種的SSR-PCR鑒定方法，是利用SSR分子標記對國內雙孢蘑菇主栽品種As2796、W192、福蘑38和A15進行PCR擴增。

利用特異引物對國內雙孢蘑菇主栽品種的基因組DNA進行SSR-PCR，不同的品種能擴增出特異性的圖譜帶型產物，所述特異引物的核昔酸序列為：

Scaf4_1k11F：5’-CAATCACAATCCCTCCAAGC-3’，

Scaf4_1k11R：5’-AAACGAATTAGGAACGGTGG-3’；