[發明專利]一種分泌辣椒堿單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用

在審

• 申請號: 201811269168.7
• 申請日: 2018-10-29
• 公開（公告）號: CN109321533A
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: 匡華;孫佳佳;胥傳來;徐麗廣;馬偉;劉麗強;吳曉玲;宋珊珊;胡擁明
• 申請（專利權）人: 江南大學;無錫迪騰敏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C12N15/06;C07K14/765;C07K16/44;G01N33/577;C07C237/08;C12R1/91
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種分泌辣椒堿單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其特征在于，所述雜交瘤細胞株已于2017年09月05日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.14689，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

2.如權利要求1所述的一種分泌辣椒堿單克隆抗體的雜交瘤細胞株的制備方法，其特征在于，包含如下步驟：

步驟1：制備辣椒堿半抗原及辣椒堿完全抗原，將獲得的辣椒堿完全抗原分別用弗氏佐劑與不完全弗氏佐劑進行乳化；

步驟2：將分別用弗氏佐劑與不完全弗氏佐劑進行乳化后的辣椒堿完全抗原通過背部皮下注射，注射進入BALB/c小鼠體內進行多次免疫，首次免疫采用完全弗氏佐劑乳化后的辣椒堿完全抗原，加強免疫采用不完全弗氏佐劑乳化后的辣椒堿完全抗原；

步驟3：將經過上述免疫過程的小鼠進行采血，通過間接ELISA檢測小鼠血清免疫效價和免疫抑制能力，刪選出血清中辣椒堿抗體含量高的獲得免疫的小鼠；

步驟4：將刪選出的小鼠用不完全弗氏佐劑乳化后的辣椒堿完全抗原再進行最后一次加強免疫，然后通過腹腔注射進行沖擊免疫，沖擊免疫采用不含弗氏佐劑的辣椒堿完全抗原進行；

步驟5：將進行沖擊免疫后的BALB/c小鼠的脾細胞和骨髓瘤細胞融合，將融合的細胞通過HAT培養基培養，利用間接ELISA檢測陽性細胞孔，并進一步利用間接競爭ELISA法測定陽性細胞孔的抑制效果，通過有限稀釋法對有最好抑制的陽性細胞孔進行亞克隆，最終篩選出獲得能分泌辣椒堿單克隆抗體的雜交瘤細胞株；

所述步驟1中的辣椒堿半抗原的分子式如下：

所述步驟1中的辣椒堿完全抗原的分子式如下：

3.權利要求1所述的一種分泌辣椒堿單克隆抗體的雜交瘤細胞株或權利要求2所述的一種分泌辣椒堿單克隆抗體的雜交瘤細胞株的制備方法在制備辣椒堿單克隆抗體方面的應用。

4.一種辣椒堿完全抗原，其特征在于，所述辣椒堿完全抗原的分子式如下：

5.如權利要求4所述的一種辣椒堿完全抗原的制備方法，其特征在于，所述方法為取辣椒堿半抗原溶于無水DMF中，得到A液；在A液中加入戊二醛溶液進行活化，得到B液；取牛血清白蛋白(BSA)溶解于碳酸鹽緩沖液(CBS溶液)中，得到C液；將B液逐滴加入C液中進行反應，得到混合液；分離混合液中的完全抗原和未偶聯的小分子半抗原，即得辣椒堿完全抗原；

所述辣椒堿半抗原的分子式如下：

6.權利要求4所述的一種辣椒堿完全抗原或權利要求5所述的一種辣椒堿完全抗原的制備方法在制備分泌辣椒堿單克隆抗體的雜交瘤細胞株、辣椒堿單克隆抗體方面的應用。

7.一種辣椒堿單克隆抗體，其特征在于，所述辣椒堿單克隆抗體是由保藏編號為CGMCCNo.14689的雜交瘤細胞株分泌獲得的。

8.如權利要求7所述的一種辣椒堿單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述方法為取BALB/c小鼠，腹腔注射石蠟油，再腹腔注射保藏編號為CGMCC No.14689的雜交瘤細胞株，注射后收集腹水，將腹水純化，將獲得的單抗低溫保存。

9.權利要求7所述的一種辣椒堿單克隆抗體或權利要求8所述的一種辣椒堿單克隆抗體的制備方法在識別辣椒堿方面的應用。

10.應用權利要求1所述的一種分泌辣椒堿單克隆抗體的雜交瘤細胞株或權利要求4所述的一種辣椒堿完全抗原或權利要求7所述的一種辣椒堿單克隆抗體制備得到的檢測試劑盒。