[發明專利]一種同時檢測葛根中11種黃酮類成分的方法

有效

• 申請號: 201811269076.9
• 申請日: 2018-10-29
• 公開（公告）號: CN109342591B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 張芳;王雨婷;王琪;盛望
• 申請（專利權）人: 北京工業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京思海天達知識產權代理有限公司 11203
• 代理人: 張立改

一種同時檢測葛根中11種黃酮類成分的方法，屬于藥物分析技術領域。采用超高液相色譜?質譜聯用法(HPLC?MS)建立葛根的多指標含量測定方法，同時測定葛根素、3'?羥基葛根素、3'?甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷、刺芒柄花苷、刺芒柄花黃素、異甘草素、鷹嘴豆芽素A 11種黃酮類成分的含量，以彌補現有技術的不足，促進對葛根黃酮類物質成分的了解及其含量測定，為其廣泛應用提供科學依據。

技術領域

本發明屬于化學物檢測領域。本發明涉及農產品中黃酮類成分的檢測方法，主要是葛根中11種黃酮類成分的檢測方法。

技術背景

葛根為豆科葛屬植物野葛[Pueraria lobata(Willd.)Ohwi]的干燥根，習稱野葛，具有解肌退熱、生津、透疹、升陽止瀉之功，用于外感發熱頭痛、項背強痛、消渴等癥狀，主產于河南、浙江、四川等地，是一種藥食同源的植物，具有較好的市場前景。

近年來，研究發現葛根生物活性成分中黃酮類物質含量最高。黃酮類物質是小分子化合物，廣泛存在于許多中草藥中，有較好的抗氧化性和清除自由基的能力。其中異黃酮是葛根的主要化學成分，包括3'-羥基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元等，并且葛根素是葛屬植物特有的活性成分?，F代藥理研究表明，該類化合物在維持血管系統穩定性方面有特效，是其降低血管阻力、改善心腦血液循環、減慢心率、降低心肌耗氧量等藥理作用的主要物質，臨床常用于心腦血管疾病的輔助治療。此外，基于其具有抗氧化損傷、抗細胞凋亡、改善血脂和血糖代謝等功能，在骨質疏松、酒精中毒及經前期綜合征等疾患的治療中也取得了一定進展。

發明內容

本發明的目的是為進一步加深葛根活性成分的深入研究，采用超高液相色譜- 質譜聯用法(HPLC-MS)建立葛根的多指標含量測定方法，同時測定葛根素、3'- 羥基葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷、刺芒柄花苷、刺芒柄花黃素、異甘草素、鷹嘴豆芽素A 11種黃酮類成分的含量，以彌補現有技術的不足，促進對葛根黃酮類物質成分的了解及其含量測定，為其廣泛應用提供科學依據。

本發明的技術方案如下：

本發明提供同時檢測葛根中葛根素、3'-羥基葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷、刺芒柄花苷、刺芒柄花黃素、異甘草素、鷹嘴豆芽素A的方法，它包括如下操作步驟：

(1)取葛根樣品干燥粉末，以質量百分比濃度為30％乙醇(分析純)超聲提取45min，于室溫下放冷，7500r/m離心5min，取上清，每0.5g葛根樣品干燥粉末對應50ml 30％乙醇，0.22μm微孔濾膜過濾，取續濾液用質量百分比濃度為10％甲醇(色譜純)稀釋1000倍，為制備供試品溶液；

(2)選擇葛根素、3'-羥基葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷、刺芒柄花苷、刺芒柄花黃素、異甘草素、鷹嘴豆芽素A 為對照品，制備對照品混合溶液；

準確稱定11種對照品適量，用甲醇溶解后，加入10％甲醇定量稀釋，制成每 1mL分別含葛根素22.93μg、3'-羥基葛根素35ug、3'-甲氧基葛根素6.47ug、大豆苷236ug、大豆苷元10ug、染料木素9ug、染料木苷332.22ug、刺芒柄花苷450ug、刺芒柄花黃素4.73ug、異甘草素8.53ug、鷹嘴豆芽素A9.8ug的溶液作為對照品混合儲備液。保存于4℃冰箱中，備用；取對照品混合儲備液適量，用10％甲醇逐級稀釋，并定量稀釋制成每1mL分別含葛根素229.3ng、3'-羥基葛根素350ng、 3'-甲氧基葛根素64.7ng、大豆苷2360ng、大豆苷元100ng、染料木素90ng、染料木苷3322.2ng、刺芒柄花苷4500ng、刺芒柄花黃素47.3ng、異甘草素85.3ng、鷹嘴豆芽素A 98ng的溶液；保存于4℃冰箱中，備用；取對照品儲備液適量，加 10％甲醇逐級稀釋，得到對照品混合溶液；