[發(fā)明專利]EGFR/Vimentin/葉酸免疫脂質(zhì)體磁球、制備方法及試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811266363.4
• 申請(qǐng)日: 2018-10-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111100839A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁曉飛;高杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 獵源（上海）生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09
• 代理公司: 上海德昭知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31204
• 代理人: 郁旦蓉

1.一種EGFR/Vimentin/葉酸免疫脂質(zhì)體磁球，用于捕獲非小細(xì)胞肺癌患者的外周血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞，其特征在于，該EGFR/Vimentin/葉酸免疫脂質(zhì)體磁球連接有EGFR抗體、Vimentin抗體以及葉酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的EGFR/Vimentin/葉酸免疫脂質(zhì)體磁球，其特征在于：

其中，所述EGFR抗體、Vimentin抗體以及葉酸的質(zhì)量比為EGFR抗體：Vimentin抗體：葉酸＝1:1:1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的EGFR/Vimentin/葉酸免疫脂質(zhì)體磁球，其特征在于，其通過(guò)以下制備方法制成：

步驟一，按EGFR抗體：Vimentin抗體：葉酸：GHDC＝1:1:1:1～1:1:1:10的質(zhì)量比，將EGFR抗體、Vimentin抗體、葉酸以及GHDC共溶于磷酸緩沖液中，在預(yù)定溫度下磁力攪拌反應(yīng)過(guò)夜，獲得第一溶液；

步驟二，用分子量為8000～14000道爾頓的透析袋對(duì)所述第一溶液進(jìn)行預(yù)定時(shí)間的透析，透析后進(jìn)行凍干得到抗體衍生物，該抗體衍生物包括EGFR-GHDC、Vimentin-GHDC以及FA-GHDC；

步驟三，按HQCMC：膽固醇＝1：0.5～1：5的質(zhì)量比，將HQCMC和膽固醇混合，獲得混合物；

步驟四，按去乙醇后的磁珠溶液：CH₂Cl₂＝1：1～1：5的體積比，將去乙醇后的磁珠溶液溶解于CH₂Cl₂，獲得第二溶液；

步驟五，按所述第二溶液：所述混合物＝1：1～1：5的體積質(zhì)量比，將所述第二溶液加入所述混合物中，獲得第三溶液；

步驟六，將所述第三溶液在冰浴下乳化2min～20min，并在乳化時(shí)把溶于水的所述抗體衍生物按所述磁珠溶液：所述抗體衍生物＝1：1～1：5的體積質(zhì)量比，加入正在乳化的所述第三溶液中，乳化完成后得到第四溶液；

步驟七，去除所述第四溶液中殘留的CH₂Cl₂，得到第五溶液；

步驟八，將所述第五溶液進(jìn)行磁分離并洗滌后，獲得EGFR/Vimentin/葉酸免疫脂質(zhì)體磁球。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的EGFR/Vimentin/葉酸免疫脂質(zhì)體磁球，其特征在于：

其中，步驟一中，所述預(yù)定溫度為2～8℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的EGFR/Vimentin/葉酸免疫脂質(zhì)體磁球，其特征在于：

其中，步驟二中，所述預(yù)定時(shí)間為10h～14h。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的EGFR/Vimentin/葉酸免疫脂質(zhì)體磁球，其特征在于：

其中，步驟六中，所述乳化為超聲乳化。

7.一種非小細(xì)胞肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)試劑盒，用于檢測(cè)已經(jīng)脫離肺部進(jìn)入外周血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞，其特征在于，包括：

權(quán)利要求1～6中任意一項(xiàng)所述的EGFR/Vimentin/葉酸免疫脂質(zhì)體磁球。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的非小細(xì)胞肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包括：

第一固定液，用于對(duì)捕獲了所述循環(huán)腫瘤細(xì)胞的EGFR/Vimentin/葉酸免疫脂質(zhì)體磁球進(jìn)行第一次細(xì)胞固定；和

第一染色劑，用于對(duì)經(jīng)過(guò)第一次固定的所述循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行第一次染色，

其中，所述第一固定液包括體積分?jǐn)?shù)為4％的多聚甲醛，

所述第一染色劑包括DAPI、CK19-FITC以及CD45-PE。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的非小細(xì)胞肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包括：

第二固定液，用于對(duì)經(jīng)過(guò)第一次染色后的所述循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行第二次固定；和

第二染色劑，用于對(duì)經(jīng)過(guò)第二次固定的所述循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行第二次染色，

其中，所述第二固定液包括質(zhì)量濃度為0.01％～0.04％的瓊脂糖溶液，

所述第二染色劑包括蘇木精和伊紅。