[發明專利]一種用茶葉中提取的糖苷酶制備甜菊雙糖苷（STB）的方法

在審

• 申請號: 201811266250.4
• 申請日: 2018-10-29
• 公開（公告）號: CN109280686A
• 公開（公告）日: 2019-01-29
• 發明（設計）人: 張永;李存彪;張磊
• 申請（專利權）人: 安徽潤海生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 孫民興

1.一種用茶葉中提取的糖苷酶制備甜菊雙糖苷(STB)的方法，其特征在于，利用茶葉中提取的糖苷酶選擇性催化水解甜菊苷，得到甜菊雙糖苷。

2.根據權利要求1所述的用茶葉中提取的糖苷酶制備甜菊雙糖苷(STB)的方法，其特征在于，利用茶葉中提取的糖苷酶選擇性催化水解甜菊苷，得到甜菊雙糖苷的具體流程包括：

步驟一：糖苷酶的提?。?/p>

步驟二：配制甜菊苷溶液；

步驟三：向甜菊苷溶液中加入糖苷酶，進行選擇性催化水解反應；

步驟四：反應后的產物離心沉淀洗滌干燥后得到甜菊雙糖苷。

3.根據權利要求2所述的用茶葉中提取的糖苷酶制備甜菊雙糖苷(STB)的方法，其特征在于，所述步驟一具體為：

稱取50-5000g將茶葉粉碎后，加入1-100g石英砂和10倍茶葉質量的4度PBS緩沖液后研磨均勻，然后放入到勻漿機中勻漿；經離心、脫鹽濃縮后冷凍干燥，得到的粗酶粉，測定酶活后冰箱冷藏保存備用。

4.根據權利要求3所述的用茶葉中提取的糖苷酶制備甜菊雙糖苷(STB)的方法，其特征在于，測定酶活時，利用對硝基苯β-葡萄糖苷酶(PNPG)比色法測定粗酶粉的酶活在50U/g到220U/g之間；利用對硝基苯酚法(PNP)法測定β-櫻草糖苷酶酶活在25U/g到100U/g之間；利用鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷(ONPG)比色法測定β-半乳糖苷酶酶活在5U/g到80U/g之間。

5.根據權利要求2所述的用茶葉中提取的糖苷酶制備甜菊雙糖苷(STB)的方法，其特征在于，所述步驟二利用pH值為6.5-9.0的PBS緩沖液配制濃度為1-100g/L的甜菊苷溶液。

6.根據權利要求2所述的用茶葉中提取的糖苷酶制備甜菊雙糖苷(STB)的方法，其特征在于，所述步驟三中糖苷酶的加入量為總酶活20-100U/g，在40-60℃高選擇性催化水解反應1天-3天。

7.根據權利要求2所述的用茶葉中提取的糖苷酶制備甜菊雙糖苷的方法，其特征在于，所述步驟四中反應后的產物經過1.6×10³g離心，沉淀用去離子水洗滌三次，然后在60℃真空干燥，得甜菊雙糖苷粉末，其純度為85％-92％。

8.根據權利要求2或7所述的用茶葉中提取的糖苷酶制備甜菊雙糖苷(STB)的方法，其特征在于，所述步驟四離心沉淀洗滌干燥后得到的甜菊雙糖苷經乙醇重結晶，純度提高至98％以上。

9.根據權利要求2所述的用茶葉中提取的糖苷酶制備甜菊雙糖苷(STB)的方法，其特征在于，所述步驟一中茶葉為綠茶、白茶、烏龍茶或紅茶。

10.根據權利要求2所述的用茶葉中提取的糖苷酶制備甜菊雙糖苷(STB)的方法，其特征在于，所述步驟三中分離甜菊雙糖苷的剩余反應液測定酶活，降低了5％-15％，能夠繼續用于可繼續用于催化甜菊苷制備甜菊雙糖苷的反應。