[發(fā)明專利]一種含銅納米棒復合物快速檢測試劑盒的制備方法及應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811263977.7
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109239064A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發(fā)明（設計）人: 黃昊文;譚芳;汪志芳;楊艷;謝瀟雪;花欣怡;陽秀梅
• 申請（專利權）人: 湖南科技大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/33
• 代理公司: 湘潭市匯智專利事務所(普通合伙) 43108
• 代理人: 宋向紅

1.一種含銅納米棒復合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)首先制備好金納米棒溶液，向金納米棒溶液中加入硫代硫酸鈉(Na₂S₂O₃)溶液，置于50℃熱水中反應5分鐘后，再加入硝酸銅(Cu(NO₃)₂)溶液，即得到具有過氧化物模擬酶性質(zhì)的含銅納米棒復合物；

(2)將步驟(1)制備的含銅納米棒復合物在離心機上以8000rpm離心10分鐘，去除上清液，再用二次蒸餾水進行分散后備用；

(3)檢測葡萄糖的含量：在不同的離心管中各加入不同濃度的葡萄糖溶液，再分別加入葡萄糖氧化酶反應，然后分別加入步驟(2)制備的含銅納米棒復合物以及顯色劑(TMB)，最后用0.1mol/L HCl調(diào)節(jié)pH，待顯色穩(wěn)定后，在紫外分光光度計上測其吸收光譜；依據(jù)葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下能夠分解產(chǎn)生雙氧水，利用含銅納米棒復合物的過氧化物模擬酶性質(zhì)進一步催化分解雙氧水產(chǎn)生羥基自由基，從而使顯色劑(TMB)顯色；根據(jù)葡萄糖濃度的不同，產(chǎn)生雙氧水的量不一樣，含銅納米棒復合物催化分解雙氧水產(chǎn)生的羥基自由基也不一樣，進而使顯色呈現(xiàn)一定梯度，再根據(jù)顯色劑在波長652nm處的吸光度值與葡萄糖濃度的關系可獲得線性關系良好的標準曲線，根據(jù)其標準曲線能計算得到待測樣品中葡萄糖的含量；

(4)往步驟(2)制備的含銅納米棒復合物中加入胰島素DNA適配體(INS-aptamer)；依據(jù)含銅納米棒復合物上的金與巰基可形成金硫化學鍵，將含銅納米棒復合物溶液通過金硫化學鍵與帶巰基的胰島素DNA適配體(INS-aptamer)相連接；

(5)依據(jù)胰島素DNA適配體(INS-aptamer)與胰島素的特異性結(jié)合，在不同的離心管中各加入步驟(4)所得已連接INS-aptamer的含銅納米棒復合物，再分別加入不同濃度的胰島素，反應20分鐘；

(6)向步驟(5)所得溶液體系中加入雙氧水溶液和TMB顯色，再根據(jù)顯色劑在波長652nm處的吸光度值與胰島素濃度的關系可獲得線性關系良好的標準曲線，根據(jù)其標準曲線能計算得到待測樣品中胰島素的含量。

2.根據(jù)權利要求1所述含銅納米棒復合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(1)所述制備金納米棒溶液是采用晶種法進行制備。

3.根據(jù)權利要求1所述含銅納米棒復合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(1)所述在制備含銅納米棒復合物過程中，加入硫代硫酸鈉溶液后納米棒的縱向等離子體共振吸收峰會發(fā)生紅移，繼續(xù)加入硝酸銅溶液后，其縱向等離子體共振吸收峰會發(fā)生藍移。

4.根據(jù)權利要求1所述含銅納米棒復合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(3)中，在葡萄糖溶液中加入葡萄糖氧化酶反應，其反應溫度為37℃，反應時間為30分鐘。

5.根據(jù)權利要求1所述含銅納米棒復合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(3)中，加入顯色劑后將溶液體系環(huán)境pH用0.1mol/L HCl調(diào)節(jié)至6。

6.根據(jù)權利要求1所述含銅納米棒復合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(3)中，對葡萄糖濃度的檢測限值為2.5×10^-6mol/L。

7.根據(jù)權利要求1所述含銅納米棒復合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(4)中，含銅納米棒復合物中加入INS-aptamer在4℃作用12小時后，再以4000rpm離心10分鐘，去除上清液，再用二次蒸餾水進行分散。

8.根據(jù)權利要求1所述含銅納米棒復合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(6)中，對胰島素濃度的檢測限值為0.014μU/mL。

9.一種如權利要求1所述含銅納米棒復合物快速檢測試劑盒的應用，其特征在于：由于1型糖尿病和2型糖尿病中的胰島素含量及葡萄糖和胰島素之間的濃度比不同，利用葡萄糖分解產(chǎn)生雙氧水和胰島素對含銅納米棒復合物的覆蓋，調(diào)節(jié)含銅納米棒復合物的用量和pH，采用TMB顯色來區(qū)分1型糖尿病和2型糖尿病。