[發明專利]一種利用煙葉生產苯乙烯的方法

有效

• 申請號: 201811261714.2
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109207526B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 吳麗君;白曉莉;段如敏;楊德中;朱杰;唐麗;劉晶;王蘿萍;錢穎穎
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12P5/00
• 分類號: C12P5/00;C12R1/07
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 金耀生

1.一種利用煙葉生產苯乙烯的方法，其特征在于按以下步驟進行：

步驟1：發酵用煙葉和/或煙葉廢棄物的制備

1）樣品收集

煙葉類樣本的收集采用隨機抽樣，主要采樣的類型包括煙葉和/或煙葉廢棄物；

2）樣品制備

將采集的樣品放入烘箱中，在不高于40℃的條件下烘干，直至可用手指捻碎，從烘箱中取出烘好的煙葉，馬上研磨，持續研磨時間不超過2min，然后過40目篩，將過篩粉末立即裝入潔凈干燥的棕色廣口瓶中密閉起來，充分搖動，混勻，此即為制備好的發酵用煙葉樣品；

步驟2：制備苯乙烯

發酵培養基組分為：葡萄糖8-10 g/每升水，步驟1制備的煙葉樣品10-15 g/每升水，pH值自然；在無菌條件下，將根際芽孢桿菌純培養物直接接種一接種環至裝有50 mL滅菌的發酵培養基的250 mL的搖瓶中，并設置不接菌株的對照組，于180轉/分鐘的搖床中，37℃培養，培養48-96 h后利用GC-MS檢測；

取上述發酵液經12000轉/分鐘離心10分鐘，棄除沉淀，將發酵液上清用環己烷萃取，得環己烷萃取物，旋蒸去除部分溶劑，用無水硫酸鈉除水后，用0.22 μm膜過濾，利用GC-MS進行定性檢測；

所述的菌株為野生型根際芽孢桿菌（Bacillus rhizosphaerae）CGMCC No. 14440，是從醇化中期的煙葉上通過選擇性培養基分離得到的；

所述的煙葉和/或煙葉廢棄物包括：新鮮煙葉、烤制后的煙葉、醇化期中的煙葉，無法進行卷煙加工的低等級或者等外級煙葉、煙草植株的上部煙葉，煙葉和煙葉廢棄物可以任意比例混合。