[發明專利]大黃魚抗菌肽piscidin 5 like及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201811258272.6
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN109295066A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 鄭利兵;毛勇;王軍;鄭煒強;陳佳;潘瀅
• 申請（專利權）人: 寧德市富發水產有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/46;C12N15/70;A61K38/17;A61P33/02;A23K20/147;A23K50/80
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

大黃魚抗菌肽piscidin 5 like及其制備方法與應用，涉及大黃魚抗菌肽。提供大黃魚抗菌肽piscidin 5 like基因的編碼序列、氨基酸序列、制備方法和應用。構建Lc?p5L重組表達載體；將所得的重組表達載體轉化宿主細胞，并對宿主細胞進行誘導表達，獲得表達產物；分離純化所得的表達產物，獲得重組蛋白rLc?p5L。rLc?p5L對刺激隱核蟲幼蟲、滋養體具有明顯的抑殺活性，因此大黃魚抗菌肽piscidin 5 like在制備抗蟲藥物和作為水產養殖業中防治病害的飼料添加劑中具有廣泛的應用價值。

技術領域

本發明涉及大黃魚抗菌肽，尤其是涉及大黃魚抗菌肽piscidin 5 like及其制備方法與應用。

背景技術

一直以來，魚類自免疫因子都是研究的熱點，AMPs作為非特異免疫系統的一個重要組成部分，近年來越來越引起學者的重視與關注。相比于傳統的抗生素，細菌幾乎不會對AMPs產生抗性，因此，AMPs有希望成為抗生素的一種替代品^[1]。AMPs已經從細菌、動物、植物分離出來，研究證明，他們在低等脊椎動物、無脊椎動物中都發揮很重要的作用，因這些動物主要或全部依靠非特異免疫系統抵御病原生物的入侵、感染。諸多報道魚類一些AMPs對刺激隱核蟲具有很強的活性^[2-3]。

Piscidins是一類重要的AMP家族，廣泛分布于魚類當中，是具α-螺旋、低分子量的一類陽離子抗菌肽家族。Piscidins家族具有較強的抗菌、抗病毒、抗寄生蟲活性^[4-6]，最先被從雜交斑紋鱸的肥大細胞中分離出來^[7]。免疫組化及基因的數據證明piscidins廣泛分布在鱸形目魚類中^[8-9]。

大黃魚(Larimichthyscrocea)一個新型piscidins-like基因(Lc-pis)是一個典型的鰓表達型多肽，在刺激隱核蟲幼蟲感染階段、滋養體脫落階段能夠誘導Lc-pis上調表達，合成肽Lc-pis具有廣譜的抗菌活性，濃度為6μM時即對刺激隱核蟲滋養體有強抗性，不同濃度Lc-pis處理滋養體的結果顯示具有濃度、時間依賴性，暗示Lc-pis不僅是一個抗菌肽，也是一個抗蟲肽；與Lc-pis相似的是分離自眼斑擬石首魚(Sciaenopsocellatus)的piscidins-like基因(So-pis)，化學合成So-pis無明顯的抑菌活性，但是對刺激隱核蟲具有抑殺活性，12μM So-pis在1h內能夠殺死超過20％的滋養體，并且具有明顯的時間依賴性；6μM So-pis能夠導致細胞膜破裂殺死一部分刺激隱核蟲幼蟲^[3]。另外，大黃魚piscidin-5-like、piscidin-5-like type2基因也被鑒定，piscidin-5-like基因是一個頭腎型表達抗菌肽^[10]。

體外重組表達抗菌肽piscidin 5 like不僅在研究大黃魚免疫防御機制方面具有重要意義，而且為研發抗刺激隱核蟲藥物提供參考依據。

參考文獻：

[1]Hancock REW,Lehrer R.Cationic peptides:a new source of antibiotics[J].Trends Biotechnol.,1998,16:82-88.

[2]LiRJ,DanXM,LiAX.Siganusoramin recombinant L-amino acid oxidase islethal to Cryptocaryon irritans[J].Fish&Shellfish Immunology.2013,(35)：1867-1873.

[3]牛素芳.2種石首魚piscidin-like抗蟲特性研究[D].廈門：廈門大學.2013,1-164.