[發(fā)明專利]CT-RCC HERV-E來源的CTL表位肽、肽庫及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811258181.2
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN111100185A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發(fā)明（設計）人: 肖建如;張騰;梁九林;趙玉曉;丁越;韓慧;岳穎;郭衛(wèi)情;譚圓圓
• 申請（專利權）人: 上海銳賽生物技術有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海三方專利事務所(普通合伙) 31127
• 代理人: 吳瑋;楊懿

本發(fā)明涉及CT?RCC HERV?E來源的CTL表位肽、肽庫及其應用，包括SEQ ID No.1至16氨基序列的CT?RCC HERV?E來源的CTL表位肽，肽庫，包含兩種以上上述氨基序列的肽，上述CT?RCC HERV?E來源的CTL表位肽可以應用于制備腎透明細胞癌疫苗，在腎透明細胞癌的免疫治療方面有巨大的潛在價值。

技術領域

本發(fā)明涉及CT-RCC HERV-E來源的CTL表位肽、肽庫及其應用。

背景技術

HERV(Human endogenous retroviruses)是基因組中的內源性病毒組分，和逆轉錄病毒高度相似，并可由逆轉錄病毒產生，是外源逆轉錄病毒偶然入侵生殖細胞的后代，HERV序列占據(jù)了人類基因組大概30億堿基對中的8%。最初始形態(tài)的HERV末端有兩個唯一的3’LTR和5’LTR，中間有gag、pol、env基因。

HERV-E(Human endogenous retrovirus group E)序列穩(wěn)定整合在人類基因組上，以孟德爾遺傳方式傳播，可以替代啟動子或增強子的轉錄活性。HERV-E序列可以修飾臨近基因表達，產生逆轉錄病毒蛋白，這包括免疫抑制env多肽，反過來又誘導自身抗體的產生。

人類基因組中有超過50種HERV-E序列被發(fā)現(xiàn)，絕大多數(shù)HERV-E以單獨的LTR序列散布在基因組中，HERV-E的前病毒gag、pol、env基因和/或3’LTR缺失。

20世紀90年代到21世紀初的一段時間，美國國立衛(wèi)生院Richard W. Childs團隊在對晚期腎癌GVT(graft-versus-tumor)的研究過程中發(fā)現(xiàn)了一種在腎透明細胞癌中選擇性表達的LTR2C類HERV-E序列，命名為CT-RCC。CT-RCC HERV-E序列全長定位于6號染色體6q15基因座，現(xiàn)已知擁有三個轉錄本CT-RCC-8(EU137846)、CT-RCC-9(EU137847)和CT-RCC-Env(JQ733905)，在腎透明細胞癌中選擇性表達，研究表明臨床上有約80%的腎透明細胞癌組織中特異性表達CT-RCCHERV-E，屬于典型的腫瘤特異性抗原。目前，對于CT-RCCHERV-E的研究發(fā)現(xiàn)該基因存在的三個轉錄本編碼一段共有序列(CR)，從中發(fā)現(xiàn)了具有高免疫原性的十肽CT-RCC-1，而CT-RCC-Env轉錄本編碼包膜蛋白膜上和跨膜組件，亦能誘發(fā)人體免疫。綜上所述，CT-RCCHERV-E具有開發(fā)靶向腎透明細胞癌特異性免疫治療的潛能。

本發(fā)明依據(jù)美國UMDP數(shù)據(jù)庫99672份中國人群樣本HLA分型，選擇中國人群高頻表達HLA類型：HLA-A*1101(27.5%)，HLA-A*2402(15.2%)，HLA-A*0201(9.5%)，HLA-B*4001(15.4%)，HLA-B*4601(13.4%)。使用IEDB或NetMHCcons軟件分析預測CT-RCCHERC-E的MHCⅠBinding表位肽，合成表位肽。同時募集健康人群志愿者進行HLA分型，篩選相應HLA類型志愿者，每個目標HLA類型入選3-4人。健康志愿者外周血單核細胞體外誘導樹突狀細胞(dendritic cell，DC)負載合成表位肽，和自體PBMC或T細胞共培養(yǎng)活化T細胞，經(jīng)IFNγELISPOT檢測篩選陽性CTL表位肽。所篩選陽性CTL表位肽利用LDH釋放和PDX模型的抑瘤試驗進一步驗證，優(yōu)化建立源于CT-RCC HERV-E同時適于中國人群高頻HLA的通用CTL表位肽庫，并開發(fā)表位肽庫在腎透明細胞癌治療藥物中的應用。

發(fā)明內容

本發(fā)明目的在于提供一組源于CT-RCC HERV-E同時適于中國人群高頻HLA的通用CTL表位肽。

為了實現(xiàn)上述目的本發(fā)明包括SEQ ID No.1至16任一氨基序列的CT-RCC HERV-E來源的CTL表位肽。

本發(fā)明還涉及上述CT-RCC HERV-E 來源的CTL表位肽在制備腎透明細胞癌疫苗中的應用。