[發(fā)明專利]一種竹葉內部解剖結構三維立體圖的獲得方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811256222.4
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN109085046B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發(fā)明（設計）人: 林樹燕;蘇佳露;王星;史無雙;萬雅雯;楊雅運;傅華君;丁雨龍
• 申請（專利權）人: 南京林業(yè)大學
• 主分類號: G01N1/36
• 分類號: G01N1/36;G01N21/84
• 代理公司: 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

1. 一種竹葉內部解剖結構三維立體圖的獲得方法，其特征在于，隨機采集完全舒展的健康功能竹葉，并用鋒利刀片迅速切下竹葉中部，大小為0.5cm×0.5cm；竹葉采集后，先立即在70% FAA液中固定；再進行復水處理：分別將葉片取出放置50%酒精-30%酒精-15%酒精-純水各1 h；然后采用氫氟酸進行去硅預處理，再進行脫水和常規(guī)石蠟制片法制片，獲得竹葉的縱切面和橫切面切片；番紅固綠雙重染色法染色，中性樹膠封片，觀察獲得竹葉的縱切面和橫切面結構圖；FAA固定后的竹葉樣品，通過酒精梯度脫水，二甲苯透明過夜，換至70%酒精后直接鏡檢獲得平切面結構圖；再用拼圖軟件將縱切面、橫切面和平切面結構圖拼構出竹葉三維示意圖；其中，去硅預處理為將竹葉置于25%氫氟酸中處理36-48 h；將采集的竹葉立即放入固定液70% FAA中固定至少48 h，取出固定后的竹葉進行梯度復水處理；去硅處理結束后，將竹葉取出，用純水清洗后，進行梯度酒精脫水：依次將竹葉置于15%酒精-30%酒精-50%酒精-70%酒精各1h；竹葉三面結構獲得后，用Photoshop CS6軟件拼構竹葉三維示意圖。

2.根據(jù)權利要求1所述的竹葉內部解剖結構三維立體圖的獲得方法，其特征在于，常規(guī)石蠟制片法為：將固定好的竹葉經70%、80%、90%乙醇逐級脫水，每級停留2 h，后再用無水乙醇脫水2次，每次停留1 h；脫水處理后的竹葉從無水乙醇中分別轉入1:1、1:3二甲苯-無水乙醇混合液中，各級停留1.5 h，后轉入純二甲苯中2次，每次停留1 h，進行透明處理；將石蠟與二甲苯按1:2比例配成混合液，將透明好的材料放入上述混合液中于38℃烘箱過夜，后更換1:1石蠟-二甲苯混合液于58 ℃烘箱2 h再轉入純蠟中2次，每次停留1 h；最后進行包埋；然后使用自動切片機切取厚度為8 μm的切片。

3.根據(jù)權利要求1所述的竹葉內部解剖結構三維立體圖的獲得方法，其特征在于，切片做好后，Leica DM2500光學顯微鏡下觀察。