[發(fā)明專利]一種測定北芪菇中含硫氨基酸含量的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811252440.0
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號(hào): CN109164191A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊衛(wèi)民;秦永其;趙青紅;杜京旗;張利軍
• 申請（專利權(quán)）人: 呂梁學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N21/31
• 代理公司: 太原科衛(wèi)專利事務(wù)所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源

1.一種測定北芪菇中含硫氨基酸含量的方法，其特征在于，以北芪菇為原料，氧化水解，超濾離心處理后進(jìn)行柱前衍生，其衍生物經(jīng)過梯度洗脫，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積測得含硫氨基酸的含量，其中，以北芪菇為原料，粉碎篩選，經(jīng)過過甲酸氧化保護(hù)，采用6mol/L的鹽酸溶液進(jìn)行酸水解，超濾離心，取上清液與衍生緩沖溶液混合，以2,4-二硝基氟苯為衍生試劑進(jìn)行衍生，所得衍生物樣液經(jīng)高效液相色譜在體積比為1:1的乙腈-水和0.05mol/L乙酸鈉為流動(dòng)相，梯度洗脫，360nm波長下檢測，對磺基丙氨酸衍生產(chǎn)物和蛋氨酸砜衍生產(chǎn)物進(jìn)行分離，測定不同濃度梯度下胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)品、蛋氨酸標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別測得胱氨酸和蛋氨酸的含量，得到含硫氨基酸的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定北芪菇中含硫氨基酸含量的方法，其特征在于，該具體過程為：

步驟a，以北芪菇為原料，粉碎篩選，保存于-4℃冰箱備用；

步驟b，按體積比9:1將濃度為88％的甲酸溶液與30％的過氧化氫溶液混合形成過甲酸過氧化氫溶液；稱取北芪菇40~60mg，置于燒杯中，添加過甲酸過氧化氫溶液，料液比為1:40，將該混合液放入冰水浴并一同放于冰箱中反應(yīng)16h，加入偏重亞硫酸鈉溶液終止劑，震蕩搖勻，靜置，得到氧化液備用；

步驟c，向上述氧化液中加入6mol/L鹽酸溶液，密封試管，110℃鼓風(fēng)干燥環(huán)境下水解22-24h；取部分氧化水解后的溶液進(jìn)行10倍稀釋，在雙光束紫外可見分光光度計(jì)上掃描，獲得氧化水解后樣液的紫外光譜圖；

步驟d，離心過濾，干燥，用超純水將試管中的氨基酸樣品溶出，定容，4000r/min離心5min，取上清液與衍生緩沖溶液混合，于容量瓶中定容，得到樣品液待用；

步驟e，以2,4-二硝基氟苯為衍生試劑，樣品液超濾后避光保存，加入衍生試劑，恒溫水浴中反應(yīng)1h，反應(yīng)結(jié)束后待其降至常溫，用平衡緩沖溶液定容，充分搖勻，靜置備用，取部分衍生后的樣液，在雙光束紫外可見分光光度計(jì)上掃描，獲得衍生樣液的紫外光譜圖；

步驟f，配置不同濃度梯度的磺基丙氨酸和蛋氨酸砜標(biāo)準(zhǔn)品溶液，測定標(biāo)準(zhǔn)品的峰吸收面積，根據(jù)濃度和吸收面積的線性關(guān)系制得標(biāo)準(zhǔn)曲線；

衍生物樣液經(jīng)高效液相色譜在體積比為1:1的乙腈-水和0.05mol/L的乙酸鈉為流動(dòng)相，360nm波長下檢測，梯度洗脫，對樣液中磺基丙氨酸衍生產(chǎn)物和蛋氨酸砜衍生產(chǎn)物進(jìn)行分離，分析樣液中磺基丙氨酸衍生產(chǎn)物和蛋氨酸砜衍生產(chǎn)物的出峰時(shí)間和峰面積，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別測得胱氨酸和蛋氨酸的含量，得到含硫氨基酸的含量。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種測定北芪菇中含硫氨基酸含量的方法，其特征在于，所述步驟b中，稱取北芪菇50mg，置于燒杯中，添加2mL過甲酸過氧化氫溶液，放入冰水浴并一同放于冰箱中反應(yīng)16h，加入0.5mL偏重亞硫酸鈉溶液終止劑，震蕩搖勻，靜置，得到氧化液備用。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種測定北芪菇中含硫氨基酸含量的方法，其特征在于，所述：乙酸鈉為流動(dòng)相A，乙腈-水為流動(dòng)相B，pH為6.8，所述梯度洗脫程序?yàn)?～0.4min，84％A、16％B；0.4～4min，70％A、30％B；4～9.4min，64％A、36％B；9.4～17min，56％A、44％B；17～28min，36％A、64％B；28～34min，0％A、100％B；34～36min，0％A、100％B；36～38min，84％A、16％B。