[發明專利]DNA編碼碎片分子庫的合成方法和連接基團的篩選方法

有效

• 申請號: 201811250368.8
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN109468310B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 熊峰;周海鵬;李笑宇
• 申請（專利權）人: 深圳勁宇生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C40B50/06;C40B30/04
• 代理公司: 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414
• 代理人: 張全文

1.一種DNA編碼碎片分子庫的合成方法，其特征在于，提供A鏈、B鏈、C鏈；

所述A鏈含有n1序列、非編碼區NC且所述A鏈連接有三叉結構基團，所述三叉結構基團的每個叉上具有官能團，每個所述官能團攜帶有保護基；所述官能團為巰基；所述保護基為叔丁基硫基﹑三苯甲基﹑苯甲酰基；

所述B鏈含有n2序列，所述n2序列為R₂結構基團的標簽；

所述C鏈含有n3序列，所述n3序列為R₃結構基團的標簽；

采用“分組-合并-分組”的合成方式，獲得具有R₁、R₂和R₃結構基團的A₅鏈，且所述n1序列為R₁結構基團的標簽。

2.如權利要求1所述的DNA編碼碎片分子庫的合成方法，其特征在于，所述“分組-合并-分組”的合成方式包括以下步驟：

將具有R₁結構基團的化合物與A鏈進行反應，使所述R₁結構基團與其中一個所述官能團發生反應，獲得具有R₁結構基團的A₁鏈；

采用DNA連接酶將A₁鏈與B鏈連接，獲得A₂鏈；

將具有R₂結構基團的化合物與A₂鏈進行反應，使所述R₂結構基團與其中一個所述官能團發生反應，獲得具有R₁和R₂結構基團的A₃鏈；

采用DNA連接酶將A₃鏈與C鏈連接，獲得A₄鏈；

將具有R₃結構基團的化合物與所述A₄鏈反應，使所述R₃結構基團與其中剩余的所述官能團發生反應，獲得具有R₁、R₂和R₃結構基團的A₅鏈。

3.一種連接基團的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

提供如權利要求1～2任一項所述的合成方法合成的DNA編碼碎片分子庫；

提供具有n4序列的D鏈，所述D鏈修飾一個具有三叉結構的連接基團L，所述D鏈的非編碼區NCr與所述DNA編碼碎片分子庫中的非編碼區NC的堿基互補；

將所述DNA編碼碎片分子庫與固載的靶點蛋白進行孵育，洗脫掉與靶點蛋白沒有親和力或者親和力較弱的DNA編碼碎片分子庫，獲得與靶點蛋白有較強親和力的DNA編碼碎片分子庫化合物；

將所述D鏈與所述與靶點蛋白有較強親和力的DNA編碼碎片分子庫化合物混合并孵育，使所述D鏈非編碼區NCr的DNA與所述與靶點蛋白有較強親和力的DNA編碼碎片分子庫化合物攜帶的非編碼區NC的DNA耦合，同時所述化合物中的3個碎片分子轉移至所述連接基團L上，并向其中加入DNA聚合酶，使所述D鏈的DNA發生延展，以復制3個碎片分子對應的n1、n2、n3序列，獲得具有三個碎片分子和連接基團L且被n1、n2、n3、n4序列編碼的雙鏈DNA。

4.如權利要求3所述的連接基團的篩選方法，其特征在于，還包括對所述的雙鏈DNA進行PCR擴增、測序，識別所述靶點蛋白特異結合的碎片組合及連接基團L。

5.如權利要求3所述的連接基團的篩選方法，其特征在于，所述連接基團L的三叉結構為三叉氨基結構。