[發(fā)明專利]一種用于大腸桿菌裂解液澄清的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201811249584.0 | 申請(qǐng)日： | 2018-10-25 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN109370907B | 公開（公告）日： | 2021-11-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 魯亮;肖水冰;秦伏波;張永霞 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 普健生物(武漢)科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N1/06 | 分類號(hào)： | C12N1/06;C12N15/10;C12N11/14 |
| 代理公司： | 南京縱橫知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32224 | 代理人： | 徐瑛;祝蓉蓉 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)*** | 國(guó)省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 大腸桿菌 裂解 澄清 方法 | ||
1.一種用于大腸桿菌裂解液澄清的方法，其特征在于，采用固定化核酸酶水解大腸桿菌裂解液中的核酸；
其中，所述固定化核酸酶的制備方法為：
A1、取正硅酸乙酯、蒸餾水和無(wú)水乙醇混勻，且體積比為1～2.5:1:1，得混合液Ⅰ；
A2、取Fe3O4磁性納米粒子加至混合液Ⅰ中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為26%的氨水催化，在磁場(chǎng)中攪拌8～12h，得混合液Ⅱ；
A3、取混合液Ⅱ于磁力架上靜置10min，過(guò)濾取濾渣用超純水反復(fù)洗滌至洗滌液為中性，在40～60℃條件下真空干燥6～10h，得磁性二氧化硅納米粒；
A4、取3-氨丙基甲基二乙氧基硅烷的乙醇溶液加至磁性二氧化硅納米粒中，同時(shí)加入偶氮二異丁腈，反復(fù)攪拌2～4h，靜置3～6h，得表面改性接枝處理的磁性二氧化硅納米粒溶液，即溶液Ⅰ；
A5、在溶液Ⅰ中加入核酸酶，在37℃下超聲波振蕩反應(yīng)10～15min，再過(guò)濾取沉淀物在45～55℃下烘干，冷卻得固定化核酸酶，所述核酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述的用于大腸桿菌裂解液澄清的方法包括以下步驟：
B1、按每100mL大腸桿菌裂解液加入4～8g的量加入固定化核酸酶，在37℃下恒溫水浴2～4h并不斷攪拌；
B2、采用磁力架進(jìn)行磁分離2～5min，得溶液Ⅱ；
B3、將溶液Ⅱ過(guò)濾，取濾渣用超純水洗滌，將洗滌水倒入濾液中混勻，洗滌后的濾渣和混勻后濾液即分別為回收的固定化核酸酶和澄清后的大腸桿菌裂解液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于大腸桿菌裂解液澄清的方法，其特征在于，步驟A5中,所述超聲波振蕩的頻率為20kHz～30kHz。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于大腸桿菌裂解液澄清的方法，其特征在于，步驟A5中,烘干溫度為45℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于大腸桿菌裂解液澄清的方法，其特征在于，步驟B1中，按每100mL大腸桿菌裂解液加入5.8g的量加入固定化核酸酶。
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