[發明專利]通過引物組合物用于進行培哚普利個體化用藥指導的方法

在審

• 申請號: 201811249389.8
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN111100917A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 馬慶偉;劉昕超;張海燕
• 申請（專利權）人: 北京毅新博創生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種通過引物組合物進行質譜法判別培哚普利個體化用藥的方法，該方法包括：根據待測的多個目的SNP位點分別設計多重擴增引物和延伸引物；配制多重擴增引物反應體系和延伸引物反應體系；在反應體系中，用多套引物同時分別對多個目的SNP位點進行擴增和單堿基延伸反應；將單堿基延伸反應后的產物進行飛行時間質譜分析，根據質譜峰所代表的不同分子量延伸引物的產物，鑒定不同藥物代謝相關SNP的基因型，指導降高血壓藥物培哚普利的個體化用藥。本發明能同時檢測3個培哚普利藥物代謝相關的SNP位點，并具有成本低、無需合成探針、耗時短、結果分析簡單便捷、應用領域極其廣泛的優點。

技術領域

本發明屬于分子生物學檢測領域，涉及一種利用質譜特征峰圖檢測多重PCR單堿基延伸產物的方法及其產品，該方法可以在兩個多重PCR反應中同時檢測多個PCR單堿基延伸擴增的寡核苷酸產物。更具體的說，該方法利用不同目的寡核苷酸片段在質譜分型過程中生成的不同的時間飛行質譜特征峰圖，針對多個目的SNP位點同時進行檢測，指導降高血壓藥物培哚普利的個體化用藥。

背景技術

人類的遺傳信息儲存在基因組中，2002年國際合作項目人類基因組計劃的最終完成，繪制出了人類基因組結構的精細圖，為相關研究提供了參考序列。人類基因組序列共由30億個堿基組成，大量研究表明，人群中1％的遺傳差異大約占基因組序列的0.1％左右，即大約300萬個堿基的差異，在人群中超過1％的變異頻率。這些差異極有可能是造成兩個人之間個體差異的遺傳因素。發現這些位點，可廣泛地應用于遺傳標記的研究、評估個體遺傳關系、評估物種進化等研究領域。

在人類基因組中，約90％的差異是以單個核苷酸的形式體現出來的，這樣的差異位點被稱作單核苷酸多態性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)。SNP具有兩個顯著的特點：一是數目眾多，據估計人類基因組中的SNP數目約在1100萬左右，目前NCBI dbSNP數據庫中已收錄來源于人類基因組的SNP達1083萬，其中經過確認的為644萬(截至2007年8月22日)，如此大量的SNP方便了選擇合適的位點進行疾病研究，也使得絕大多數基因組區域在SNP覆蓋范圍內；另外一個特點是SNP位點大多數為雙態，即在一個位點上僅有兩種表現形式(基因型)，這樣很容易就能設計出高通量自動化的檢測方法。正因為這兩個特點，使得SNP位點越來越受到研究者的青睞，被譽為是繼限制性片段長度多態性(RestrictionFragment Length Polymorphism，RFLP)和短串聯重復序列(short tandem repeat，STR)之后的第三代分子標記物。人類基因組計劃完成前后，基因組學研究的重點逐漸轉向SNP領域，因此，SNP在遺傳標記學、生物群體遺傳學、生物分類學、遺傳育種學、物種或人類進化學、法科學、藥物基因組學等領域都有重要的應用。

心血管疾病是全球人類健康的首要疾病負擔。我國心血管病患病率處于持續上升階段。高血壓是最常見的心血管疾病之一，也是心血管病的主要危險因素。高血壓病人全球約有6.9億人，發病率高達31.3％。流行病學研究顯示，血壓水平與心血管病發病率呈線性相關；血壓升高是腦卒中和冠心病發病的獨立危險因素。高血壓是引起危及生命的心、腦血管病如心肌梗死、腦卒中、腎臟功能不全等的主要原因。因此，有效控制血壓對防止高血壓患者心腦血管并發癥的發生具有重大的臨床意義。

臨床上用于治療高血壓的藥物主要分為五類：利尿劑、β-腎上腺素受體阻滯劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉換酶抑制劑和血管緊張素II受體拮抗劑。后兩者都是作用于RAAS系統的抗高血壓藥物。為了降低相關的病死率及致殘率，高血壓患者通常需要長期服用降壓藥物。培哚普利(Perindopril)為第三代血管緊張素轉換酶(ACE)抑制劑，服后6小時降壓效果最大，作用持續時間長，培哚普利可擴張大、小動脈，減少血容量，降低系統血管阻力、左室充盈壓和肺毛細血管楔壓，增加心排血量和每搏輸出量，增加心臟指數而不改變心率，提高患者運動耐量，減輕左室心肌肥厚，改善血流動力學。本品耐受性好，不引起高血糖，對血脂亦無不良影響。培哚普利服后對ACE的抑制較其他ACE抑制劑起效慢，對ACE的抑制率達90％以上，服后1小時起效，3～4小時達最大藥理效應，維持24小時。