[發(fā)明專利]酵母DNA的保真存儲方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811249175.0 | 申請日： | 2018-10-25 |
| 公開（公告）號： | CN109402111A | 公開（公告）日： | 2019-03-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 寧康;李銳豪;陳超云;朱雪 | 申請（專利權(quán)）人： | 華中科技大學(xué)鄂州工業(yè)技術(shù)研究院;華中科技大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 武漢智嘉聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231 | 代理人： | 黃君軍 |
| 地址： | 436044 湖北*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 離心管 紫外光 酵母DNA 上層 混合液 振蕩 保真 混勻 氯仿 冷凍 存儲 飽和苯酚 酵母樣本 離心清洗 時間選擇 信息存儲 重懸菌體 提取DNA 保真度 玻璃珠 保存 補加 冷藏 損傷 | ||
1.一種酵母DNA的保真存儲方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟1、珠磨法提取樣本中的DNA：將酵母樣本溶液于離心管離心，用TE緩沖液重懸菌體，離心清洗，收集的菌體用TE緩沖液懸起后加玻璃珠，再加Tirs飽和苯酚，得到的混合液振蕩5-10min，冷凍，離心；吸取上層水相轉(zhuǎn)移至一個新的離心管中，加TE緩沖液、氯仿混勻后冷藏，再離心；轉(zhuǎn)移上層水相至一個新的離心管中，補加TE緩沖液和RNase消化，加入氯仿混勻，冷凍，離心；轉(zhuǎn)移上層水相至一個新的離心管中，至此，上層水相中即含有純化好的酵母基因組DNA；
步驟2、將純化好的酵母基因組DNA于紫外光下、溫度為15℃～25℃、pH為7～8的條件下保存。
2.如權(quán)利要求1所述酵母DNA的保真存儲方法，其特征在于，所述步驟1中，取樣本溶液于離心管，離心轉(zhuǎn)速為8000g，離心時間為6min。
3.如權(quán)利要求1所述酵母DNA的保真存儲方法，其特征在于，所述步驟1中，所述玻璃珠直徑為425-600um。
4.如權(quán)利要求1所述酵母DNA的保真存儲方法，其特征在于，所述步驟1中，得到的混合液在漩渦振蕩器上振蕩后，于放置4℃冰箱冷凍6min，13000g，離心6min。
5.如權(quán)利要求1所述酵母DNA的保真存儲方法，其特征在于，所述步驟1中，吸取上層水相轉(zhuǎn)移至一個新的離心管時，加TE緩沖液、氯仿混勻后，于4℃冰箱冷藏5min，13000g，離心10min，重復(fù)此步驟兩到三次。
6.如權(quán)利要求1所述酵母DNA的保真存儲方法，其特征在于，所述步驟1中，轉(zhuǎn)移上層水相至一個新的離心管時，補加TE緩沖液和10mg/ml RNase，37℃消化13min。
7.如權(quán)利要求1所述酵母DNA的保真存儲方法，其特征在于，所述步驟1中，RNase消化后加入氯仿混勻，于4℃冰箱冷凍5min，13000g，離心5min。
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