[發明專利]一種副豬嗜血桿菌抗體檢測試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 201811248666.3
• 申請日: 2018-10-24
• 公開（公告）號: CN109470849A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發明（設計）人: 文翼平;王正皓;文心田;曹三杰;黃小波;伍銳;趙勤
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發明公開了一種副豬嗜血桿菌抗體的ELISA檢測試劑盒，它是以YfeA蛋白作為抗原，檢測待檢樣品中是否含有副豬嗜血桿菌抗體。本發明還公開了前述試劑盒的使用方法。本發明可以有效檢測副豬嗜血桿菌抗體，具有特異性強、靈敏度高、簡單、快速等特點，可用于臨床檢測豬是否攜帶副豬嗜血桿菌，應用前景良好。

技術領域

本發明涉及抗體檢測領域，特別涉及一種副豬嗜血桿菌抗體檢測方法。

背景技術

副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis，Hps)作為一類呼吸道致病菌，能引起豬典型的“六炎四水”的病理表現，即肺炎、胸膜炎、心包炎、腹膜炎、腦膜炎和關節炎以及胸腔積液、心包積液、腹腔積液和關節積液，嚴重阻礙其生長和育肥，也常導致豬的死亡，是保育舍和育肥舍最大的威脅之一。

目前對Hps的檢測方法很多，例如：16s rRNA原位雜交、免疫組化、PCR法、環介導等溫擴增技術等，但它們針對的對象是細菌本身，不能直接反映豬群對Hps的免疫狀況。

豬群Hps的抗體水平能直接映射罹患副豬嗜血桿菌病的風險，有助于免疫程序的制定。目前，國內與計劃免疫Hps的規模化養豬場較少，監測豬群的Hps抗體于輔助診斷有著積極意義。

目前最常見的針對Hps抗體水平的檢測方法是間接ELISA法，它以Hps菌體為抗原，檢測豬血清中Hps的抗體。對于臨床待檢血清，全菌抗原復雜的蛋白成分可能產生的非特異性結合會干擾檢測的準確性，提高假陽性的概率，很多時候不能有效檢出Hps抗體。

進口試劑盒能有效檢測Hps抗體，但價格昂貴，所有試劑盒的包被抗原都屬于商業機密，抗原的屬性不明。

研究上傾向于使用Hps穩定表達的單一蛋白為抗原檢測Hps抗體水平。朱曉明用MnSOD蛋白為抗原，檢測了來自全國的1610份Hps陽性血清，最終檢出了876份，陽性符合率為54.41％(副豬嗜血桿菌重組蛋白ELISA檢測方法的建立及亞單位疫苗候選因子的篩選，南京農業大學碩士學位論文，2015)，不能滿足實際需求。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種Hps抗體檢測試劑盒。

本發明提供了一種檢測副豬嗜血桿菌抗體的ELISA檢測試劑盒，它是以氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的YfeA蛋白為抗原，檢測待檢樣品中的副豬嗜血桿菌抗體。

前述的試劑盒，屬于間接ELISA檢測試劑盒，包括如下組分：

(1)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的YfeA蛋白；

(2)酶標版；

(3)抗原包被液；

(4)洗滌液；

(5)封閉液；

(6)樣品稀釋液；

(7)酶標二抗；

(8)底物反應顯色體系；

(9)終止液。

進一步地，所述抗原包被液是碳酸鹽緩沖液。

進一步地，所述洗滌液或樣品稀釋液為PBST溶液。

進一步地，所述封閉液是2％BSA的PBS。

進一步地，所述二抗為辣根過氧化物酶標記的兔抗豬IgG。

進一步地，所述底物反應顯色體系為由A液和B液組成，臨用前1∶1混合，每孔用量100μL；

所述A液配方為：每100mL含2.72g醋酸鈉、0.32g檸檬酸和60μL 30％的過氧化氫溶液；