[發明專利]一種連續體積梯度毛細管數字PCR裝置及其使用方法

有效

• 申請號: 201811248584.9
• 申請日: 2018-10-24
• 公開（公告）號: CN109355178B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 李孝錦
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院
• 主分類號: C12M1/38
• 分類號: C12M1/38;C12M1/00
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種毛細管在數字PCR中的用途，其特征在于，所述毛細管內徑由大到小連續變化，且所述毛細管按照如下方法制備而成：將內徑為1mm毛細管在酒精燈燒烤下，均勻用力拉制毛細管至斷裂，得到粗端內徑1mm、細端內徑20μm、長3cm的毛細管。

2.一種連續體積梯度毛細管數字PCR裝置，其特征在于，該裝置包括：

一個可編程熱循環儀；

毛細管，所述毛細管內徑由大到小連續變化，且所述毛細管按照如下方法制備而成：將內徑為1mm毛細管在酒精燈燒烤下，均勻用力拉制毛細管至斷裂，得到粗端內徑1mm、細端內徑20μm、長3cm的毛細管；

一個熒光信號采集設備。

3.如權利要求2所述的裝置，其特征在于，所述可編程熱循環儀是PCR儀；和/或，所述熒光信號采集設備是熒光顯微鏡。

4.權利要求3所述裝置的使用方法，其特征在于，包含以下步驟：

(1)將含熒光基團的PCR反應體系和與水等密度油相按照1:(2～4)的比例震蕩混勻，置入內徑由大到小連續變化的毛細管中，封閉毛細管兩端；

(2)加熱使油相和水相沿毛細管徑向交替分布；

(3)進行PCR反應，熒光信號采集設備下統計陽性微滴占比30％～50％區域的微滴數和微滴半徑，計算PCR模板拷貝數。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(2)加熱條件為，95℃下維持10min。

6.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR反應體系和與水等密度油相的比例是1:3(v/v)。

7.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述油相為蓖麻油與石蠟油按3:1(v/v)比例混合，再用該混合物配制膽固醇飽和溶液，即得。

8.如權利要求4或7所述的方法，其特征在于，所述油相還含有表面活性劑。

9.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR反應體系的熒光基團位于探針上，或者位于雙鏈熒光染料分子上。