[發明專利]一種端粒酶催化蛋白亞單位hTERT活性的檢測方法在審
| 申請號： | 201811246277.7 | 申請日： | 2018-10-23 |
| 公開（公告）號： | CN109321645A | 公開（公告）日： | 2019-02-12 |
| 發明（設計）人： | 邱廣斌 | 申請（專利權）人： | 深圳市慧思基因科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/686 | 分類號： | C12Q1/686;C12Q1/48 |
| 代理公司： | 深圳市徽正知識產權代理有限公司 44405 | 代理人： | 李想 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市龍崗區*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 催化蛋白 端粒酶 檢測 亞單位 引物 分子生物學 電泳檢測 活性檢測 引物擴增 辨識度 反轉錄 靈敏度 總RNA 靈敏 | ||
1.一種端粒酶催化蛋白亞單位hTERT活性的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟一，引物合成，首先根據端粒酶催化蛋白亞單位hTERT序列設計hTERT上游引物和hTERT下游引物，然后根據已知的β-Actin序列信息，涉及β-Actin上游引物和β-Actin下游引物；
步驟二，總RNA提取，取200-300g組織加入1.2-2.0mL TRIZO，放置9-15min，然后加入0.4-0.8mL氯仿，充分混勻后防止5-10min，4℃10000-12000r/min離心20-30min，吸取上清，加入1-3mL異丙醇，混勻后放置12-15min，4℃10000-12000r/min離心20-30min，然后加入2-4mL 0-10℃75％乙醇，混勻后4℃8000-10000r/min離心12-15min，去上清并干燥，用水溶解，得到總RNA；
步驟三，hTERT cDNA擴增，將步驟二得到的總RNA反轉錄成cDNA第一鏈，然后以cDNA第一鏈為模板，加入hTERT上游引物、hTERT下游引物、β-Actin上游引物和β-Actin下游引物，采用PCR方法擴增，得到hTERT cDNA擴增產物和β-Actin擴增產物；
步驟四，hTERT cDNA檢測，將步驟三得到的hTERT cDNA擴增產物和β-Actin擴增產物采用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，hTERT cDNA擴增產物片段長度應為356bp，β-Actin擴增產物片段長度應為500bp，以此判斷檢測結果。
2.根據權利要求1所述的一種端粒酶催化蛋白亞單位hTERT活性的檢測方法，其特征在于，所述步驟一中hTERT上游引物序列為SEQ ID NO:1，所述步驟一中hTERT下游引物序列為SEQ ID NO:2。
3.根據權利要求1所述的一種端粒酶催化蛋白亞單位hTERT活性的檢測方法，其特征在于，所述步驟一中β-Actin上游引物序列為SEQ ID NO:3，所述步驟一中β-Actin下游引物序列為SEQ ID NO:4。
4.一種檢測端粒酶催化蛋白研單位mRNA活性的產品，其特征在于，所述產品包括總RNA提取試劑、RNA反轉錄試劑、PCR擴增試劑、和電泳檢測試劑。
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