[發明專利]一種黃芩的鑒定方法及其應用

在審

• 申請號: 201811246272.4
• 申請日: 2018-10-24
• 公開（公告）號: CN109507311A
• 公開（公告）日: 2019-03-22
• 發明（設計）人: 陳鐘;任曉亮;趙倩;游慧;邱峰
• 申請（專利權）人: 揚子江藥業集團有限公司;天津中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 牛利民;張奎燕

1.一種黃芩的鑒定方法，所述鑒定方法包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：以黃芩制備得供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：以溶解有黃芩苷對照品、漢黃芩苷對照品、黃芩素對照品、漢黃芩素對照品的溶液為對照品溶液；

(3)采用HPLC分別測定步驟(1)的供試品溶液和步驟(2)的對照品溶液，并分別得到所述供試品溶液和所述對照品溶液的液相色譜；

(4)將步驟(3)得到的液相色譜導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統分析，得到黃芩指紋圖譜；

(5)采用層序聚類分析、主成分分析、或偏最小二乘分析處理步驟(4)得到的黃芩指紋圖譜數據，從而對黃芩或其炮制品進行分類鑒別。

2.根據權利要求1所述的鑒定方法，其中，所述步驟(1)的供試品溶液的制備包括：將黃芩粉碎后過3號藥典篩，精密稱定，置于10mL容量瓶中，加入體積分數為70％-100％的甲醇水溶液，定容至刻度，稱定重量，超聲處理30min-50min，冷卻至室溫，用體積分數為70％-100％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，離心機4000r/min-6000r/min離心5min-15min，取上清液，過0.45μm的微孔濾膜，取續濾液作為供試品溶液；

或者，所述步驟(1)供試品溶液的制備包括：將黃芩粉碎后過3號藥典篩，取黃芩粉末0.2g，精密稱定，置于10mL容量瓶中，加入體積分數為80％的甲醇水溶液，定容至刻度，稱定重量，超聲處理40min，冷卻至室溫，用體積分數為80％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，離心機4000r/min離心10min，取上清液，過0.45μm的微孔濾膜，取續濾液作為供試品溶液。

3.根據權利要求1所述的鑒定方法，其中，所述步驟(2)的對照品溶液的制備包括：精密稱取黃芩苷對照品、漢黃芩苷對照品、黃芩素對照品、漢黃芩素對照品，加溶劑制成每1mL含有100μg～300μg黃芩苷、50μg～150μg漢黃芩苷、50μg～150μg黃芩素和10μg～50μg漢黃芩素的對照品溶液；

或者，所述步驟(2)對照品溶液的制備包括：精密稱取黃芩苷對照品、漢黃芩苷對照品、黃芩素對照品、漢黃芩素對照品，加體積分數為80％的甲醇水溶液制成每1mL含有240μg黃芩苷、100μg漢黃芩苷、100μg黃芩素和30μg漢黃芩素的對照品溶液。

4.根據權利要求1所述的鑒定方法，其中，所述步驟(3)包括設置HPLC色譜條件：色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，柱溫25℃-35℃，流速為0.8mL/min-1.2mL/min，檢測波長250nm-320nm，并開啟DAD檢測；以乙腈為流動相A，以體積分數為0.06％-0.2％的磷酸水溶液為流動相B，在體積比為15～85:85～15的范圍內梯度洗脫；

分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液5μL～20μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液和對照品溶液的液相色譜。

5.根據權利要求4所述的鑒定方法，其中，所述步驟(3)包括設置HPLC色譜條件：色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，以C18(4.6mm×150mm，5.0μm)為色譜柱，柱溫30℃，流速為1.0mL/min，檢測波長為277nm，并開啟DAD檢測；以乙腈為流動相A，以體積分數為0.2％的磷酸水溶液為流動相B，進行梯度洗脫，流動相A、B的比例變化為0～15min，

A:B為15％:85％→15％:85％；15～30min，A:B為15％:85％→25％:75％；30～55min，A:B為25％:75％→30％:70％；55～85min，A:B為30％:70％→85％:15％；

分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液5μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液和對照品溶液的液相色譜。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的鑒定方法，其中，所述步驟(4)包括：采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2004A版，將步驟(3)得到的液相色譜的數據導入、多點校正、數據匹配，分析得到黃芩指紋圖譜。