[發明專利]一種用于獲取抗體序列的擴增引物和獲取抗體序列的方法

在審

• 申請號: 201811245491.0
• 申請日: 2018-10-23
• 公開（公告）號: CN109295051A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 程曉東
• 申請（專利權）人: 程曉東;杭州來伯生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/13;C12N15/10;C12Q1/6876
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李進

本發明公開了一種用于獲取抗體序列的擴增引物和獲取抗體序列的方法，涉及抗體技術領域。該擴增引物包括如下引物對中的任意一種或兩種：重鏈引物對和輕鏈引物對，重鏈引物對包括：重鏈上游引物和重鏈下游引物，輕鏈引物對包括：輕鏈上游引物和輕鏈下游引物。該擴增引物可以直接以來自分泌抗體的細胞的基因組DNA為模板進行擴增，得到抗體可變區基因序列，進而確定抗體的可變區序列，具有方便、快速、節約成本、人力及時間，結果可靠等特點。

技術領域

本發明涉及抗體技術領域，具體而言，涉及一種用于獲取抗體序列的擴增引物和獲取抗體序列的方法。

背景技術

現有的單克隆抗體序列獲取的方法是：首先提取分泌抗體的細胞 (雜交瘤細胞，B細胞等)的RNA，然后進行反轉錄，通過設計簡并引物進行序列擴增，或采用5′RACE方法對序列進行擴增，進一步對擴增產物進行克隆及Sanger測序獲得抗體序列。亦可以通過抗體的氨基酸測序獲得抗體的序列信息，再經過基因合成獲得抗體序列。

現有方法首先進行細胞的RNA提取操作，RNA的特點是易降解，不如DNA穩定。提取RNA后，再進行反轉錄，以cDNA為模板使用簡并引物或者5′RACE方法進行擴增。步驟繁瑣，失敗率較高，且成本也較高。

抗體氨基酸測序方法的缺點：價格昂貴，實驗周期較長。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于獲取抗體序列的擴增引物，該擴增引物可以直接以來自分泌抗體的細胞的基因組DNA為模板進行擴增，得到抗體可變區基因序列，進而確定抗體的可變區序列，具有操作方便、快速，節約成本、人力及時間，結果可靠等特點。

本發明的另一目的在于提供獲取抗體序列的方法，該方法直接以來自分泌抗體的細胞的基因組DNA為模板進行擴增，得到抗體可變區基因序列，進而確定抗體的可變區序列，具有操作方便、快速，節約成本、人力及時間，結果可靠等特點。

本發明的另一目的在于提供試劑盒，該試劑盒可以用于鑒定抗體的序列。

本發明是這樣實現的：

一方面，本發明提供了一種用于獲取抗體序列的擴增引物，其包括如下引物對中的任意一種或兩種：重鏈引物對和輕鏈引物對；

其中，重鏈引物對包括：重鏈上游引物和重鏈下游引物；

所述重鏈上游引物的互補結合區位于涵蓋重鏈V基因的上游部分序列和所述重鏈V基因的5’端部分序列的區域中，所述重鏈下游引物的互補結合區位于涵蓋重鏈J基因和位于所述重鏈J基因與重鏈 C基因間的內含子的區域中；

輕鏈引物對包括：輕鏈上游引物和輕鏈下游引物；

輕鏈上游引物的互補結合區位于涵蓋輕鏈V基因的上游部分序列和所述輕鏈V基因的5’端部分序列的區域中，所述輕鏈下游引物的互補結合區位于涵蓋輕鏈J基因和位于所述輕鏈J基因與輕鏈C基因間的內含子的區域中。

抗體的產生經過了基因重排(見圖1)，在胚系基因組上，抗體基因片段具有多樣性，而經過V,D,J基因重排，最終形成的抗體僅包含其中每種基因簇中的一個基因片段，且J基因相對數量較少可作為引物設計的位點。同時J基因與C基因之間的intron序列是保守的，這段intron序列則可作為保守位點來設計擴增抗體V區的引物。

本發明首次提出將擴增引物的下游引物設計位置選在J基因上或J基因與C基因中間的內含子(intron)上，對擴增產物進行序列分析，從而獲得編碼單克隆抗體可變區的基因編碼序列信息，該擴增引物可通過直接以基因組DNA為模板進行抗體序列擴增，避免了提取RNA和反轉錄的步驟，提高獲取抗體序列的效率，有利于降低成本，具有操作方便、快速，節約成本、人力及時間，結果可靠等特點。