[發(fā)明專利]農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜椒遺傳轉(zhuǎn)化方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811244586.0
• 申請日: 2018-10-24
• 公開（公告）號(hào): CN110511956A
• 公開（公告）日: 2019-11-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 冀蘆沙;蘇振華;王華森
• 申請（專利權(quán)）人: 聊城大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/82
• 分類號(hào): C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 31219 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 張新鑫;許亦琳<國際申請>=<國際公布>

1.一種根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜椒遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述方法至少包括以下步驟：

(1)提供甜椒外植體；

(2)提供含有目的基因的根癌農(nóng)桿菌，侵染甜椒外植體3～7min，共培養(yǎng)36～72h，共培養(yǎng)時(shí)采用暗培養(yǎng)，培養(yǎng)基中6-芐氨基嘌呤濃度為3～5mg·L-1，α-萘乙酸的濃度為0.15～0.25mg·L^-1，乙酰丁香酮的濃度為小于200mmol/L；

(3)選擇培養(yǎng)；培養(yǎng)基中6-芐氨基嘌呤濃度為3～5mg·L^-1，α-萘乙酸的濃度為0.15～0.25mg·L^-1，卡那霉素濃度為45～75mg·L^-1，頭孢菌素的濃度為300～500mg·L^-1；

(4)生芽培養(yǎng)：培養(yǎng)基中卡那霉素濃度為45～75mg·L^-1，6-芐氨基嘌呤的濃度為3～5mg·L^-1，α-萘乙酸的濃度為0.15～0.25mg·L^-1，濃度為300～500mg·L^-1的頭孢菌素或者濃度為100～300mg·L^-1的特美汀；

(5)生根培養(yǎng)：培養(yǎng)基中α-萘乙酸的濃度為3～5mg·L^-1，6-芐氨基嘌呤的濃度為0.15～0.25mg·L^-1，濃度為300～500mg·L^-1的頭孢菌素或者濃度為100～300mg·L^-1的特美汀。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜椒遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述方法中使用的全部培養(yǎng)基的pH為5.6～6.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜椒遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述方法中使用的培養(yǎng)基都為MS培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜椒遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(2)中溫度23～26℃，暗培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間36～72h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜椒遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(3)中溫度23～26℃，光照條件1500～2200lux，14-18h/d，培養(yǎng)時(shí)間10～17d。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜椒遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(4)中溫度23～26℃，光照強(qiáng)度1500～2200lux，14-18h/d，培養(yǎng)時(shí)間10～17d。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜椒遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(5)中溫度23～26℃，光照強(qiáng)度1500～2200lux，14-18h/d，培養(yǎng)時(shí)間10～17d。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜椒遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述頭孢菌素選自頭孢噻吩鈉、氨芐青霉素、羧芐青霉素、紅霉素、頭孢曲松鈉中的任意一種或幾種。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜椒遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(1)還包括對甜椒外植體經(jīng)過預(yù)培養(yǎng)。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜椒遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(1)中甜椒外植體采用子葉節(jié)頂端的分生組織。