[發明專利]血清中25-羥基維生素D液相色譜串聯質譜聯用檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201811242602.2
• 申請日: 2018-10-24
• 公開（公告）號: CN109212091A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 李艷;許舒欣;李小強;胡瑋;賈明正;程文播
• 申請（專利權）人: 天津國科醫工科技發展有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產權代理有限公司 12211
• 代理人: 張月

1.血清中25-羥基維生素D液相色譜串聯質譜聯用檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)取血清樣品于樣品管中；

(2)向每個樣品中加入含有內標混合液的沉淀劑，渦旋混勻；

(3)向每個樣品中再加入萃取劑，渦旋混勻；

(4)樣品靜置后取上清液于進樣管中；

(5)室溫下氮氣吹干后加入復溶液，渦旋后采用液相色譜串聯質譜法進行檢測，并通過比較25-羥基維生素D和25-羥基維生素D的內標峰面積來得出待測血清中25-羥基維生素D的含量。

2.根據權利要求1所述的血清中25-羥基維生素D液相色譜串聯質譜聯用檢測方法，其特征在于：步驟(2)中，內標混合液包括25-羥基維生素D₂內標和25-羥基維生素D₃內標。

3.根據權利要求1所述的血清中25-羥基維生素D液相色譜串聯質譜聯用檢測方法，其特征在于：步驟(1)中，血清的選用量為90-200μL；步驟(2)中，含有內標混合液的沉淀劑的用量為300-600μL，其中內標混合液與沉淀劑的體積比為1:(10-30)，渦旋混勻時間為30-90s；步驟(3)中，萃取劑的用量為800-1000μL，渦旋混勻時間為60-120s；步驟(4)中，樣品靜置時間為30-90s，加入進樣管的上清液體積為750-900μL；步驟(5)中，復溶液的用量為100-200μL，渦旋時間為30-60s；優選的，步驟(1)中，血清的選用量為100μL；步驟(2)中，含有內標混合液的沉淀劑的用量為310μL，其中內標混合液與沉淀劑的體積比為1:(10-30)，渦旋混勻時間為60s；步驟(3)中，萃取劑的用量為900μL，渦旋混勻時間為120s；步驟(4)中，樣品靜置時間為60s，加入進樣管的上清液體積為800μL；步驟(5)中，復溶液的用量為100μL，渦旋時間為30s。

4.根據權利要求1所述的血清中25-羥基維生素D液相色譜串聯質譜聯用檢測方法，其特征在于：步驟(2)中，沉淀劑為甲醇和乙腈按體積比1:1混合的混合溶液；步驟(3)中，萃取劑為HPLC級正己烷；步驟(5)中，復溶液為40-60v/v％的甲醇水溶液，洗針液為50～80v/v％的甲醇水溶液；優選的，步驟(5)中，復溶液為50v/v％的甲醇水溶液，洗針液為50v/v％的甲醇水溶液。

5.根據權利要求1所述的血清中25-羥基維生素D液相色譜串聯質譜聯用檢測方法，其特征在于：步驟(5)中，液相色譜串聯質譜法檢測時的色譜條件如下：采用梯度洗脫程序，0.05～0.3v/v％的甲酸水溶液作為流動相

A，0.05～0.3v/v％的甲酸甲醇溶液作為流動相B；優選的，梯度洗脫程序中流動相A采用0.1v/v％的甲酸水溶液，流動相B采用0.1v/v％的甲酸甲醇溶液。