[發明專利]重組纖維素內切酶基因及其蛋白和蛋白制備方法

有效

• 申請號: 201811240711.0
• 申請日: 2018-10-23
• 公開（公告）號: CN109280672B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 李洪波;胡興;江素珍;米丹;張賽名
• 申請（專利權）人: 懷化學院
• 主分類號: C12N15/56
• 分類號: C12N15/56;C12N9/42;C12N15/70
• 代理公司: 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 秦佩

1.重組纖維素內切酶基因，其特征在于，所述基因的序列為序列表中SEQ ID NO.1的核苷酸序列。

2.根據權利要求1所述的基因編碼得到的纖維素內切酶。

3.根據權利要求2所述的纖維素內切酶，其特征在于：所述纖維素內切酶的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。

4.含有權利要求1所述基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。

5.根據權利要求4所述的重組載體，由空載體和插入該空載體的目的基因組成，其特征在于，所述目的基因為權利要求1所述的基因。

6.根據權利要求5所述的重組載體，其特征在于，所述空載體為pET28載體。

7.一種權利要求2或3所述的重組纖維素內切酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將權利要求1所述的基因重組到構建到pET28載體中；再轉化到大腸桿菌菌株中，得到表達株；

2)將步驟1)表達株在LB液體培養基中培養，并加入0.1～0.5mM的IPTG誘導，發酵完畢，超聲破碎，離心取上清，得可溶性重組的纖維素內切酶。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，還包括蛋白純化步驟：用DEAE層析柱對步驟2)得到的上清液進行純化，先用平衡緩沖液平衡層析柱，再將上清液過柱，用含20mMNa₂HPO₄，20～30mM NaCl，pH7.0緩沖液預洗柱子，然后用含100mM～200mM NaCl，20mMNa₂HPO₄，pH7.0緩沖液溶液將蛋白洗脫下來即可。

9.根據權利要求7或8所述制備方法得到的蛋白。

10.權利要求1所述基因、權利要求2、3或9所述蛋白、權利要求4所述重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌在生物燃料乙醇的生產、食品、飼養和/或印染領域中的應用。