[發(fā)明專利]一種干細胞藥物篩選方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811240688.5
• 申請日: 2018-10-23
• 公開（公告）號: CN109294975A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃飛;徐曉艷;李玉秋
• 申請（專利權(quán)）人: 山東華思生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/02
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 馬國冉

本發(fā)明涉及一種干細胞藥物篩選方法。步驟包括：將疾病模型的多能型誘導(dǎo)干細胞進行培養(yǎng)，再誘導(dǎo)成成體細胞；將誘導(dǎo)產(chǎn)生的成體細胞加入配制好的不同濃度的篩選藥物共同培養(yǎng)；檢測不同時間點經(jīng)篩選藥物培養(yǎng)的成體細胞在細胞形態(tài)、細胞活力、細胞增值凋亡能力、細胞LDH和ATP水平、相應(yīng)基因蛋白表達、電生理上的變化情況，分析藥物對經(jīng)篩選藥物培養(yǎng)的成體細胞的作用。本發(fā)明將疾病模型的多能型誘導(dǎo)干細胞轉(zhuǎn)化為藥物直接作用的具有疾病特征的人源的靶細胞，在靶細胞上進行藥物篩選，既減少了耗資，縮短了周期，降低了干擾因素，又解決了從實驗室研究到動物實驗階段的有效性差異。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種干細胞藥物篩選方法。

背景技術(shù)

干細胞是一種具有自我復(fù)制和多向分化潛能的原始細胞，是機體的起源細胞，是形成人體各種組織器官的源泉。干細胞具有低毒性(或無毒性)、無免疫原性、多項分化等多種優(yōu)勢，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。目前，干細胞多用于疾病治療，但其除了在疾病治療領(lǐng)域有研究價值外，在藥物評價方面也會有突破性的應(yīng)用價值。

藥品作為一種特殊商品，關(guān)乎人類的生命。我國藥企眾多，藥品品種數(shù)量龐大，根據(jù)《2017年度食品藥品監(jiān)管統(tǒng)計年報》顯示，截止2017年11月，全國藥企4376家，全年產(chǎn)值5000多億元，隨著市場競爭激烈，藥企投入巨資研發(fā)新藥，我國每年約研發(fā)60000多種新藥，國家鼓勵社會力量參與藥品評價服務(wù)。

傳統(tǒng)新藥評價往往需要經(jīng)過實驗室研究、動物實驗(臨床藥物毒理實驗)、臨床試驗研究和新藥檢測期四個階段，該種評價方式存在耗資大、周期長、陽性率低等弊端，且存在從動物研究直接到臨床試驗研究的風險。據(jù)統(tǒng)計，在美國一種新藥從開始研發(fā)到獲得批準，平均需要8.5年，花費數(shù)億美元，而每5000種候選藥物中，只有5種能夠進入臨床試驗，最終只有1種藥物能夠被獲準上市。面對如此耗時耗力耗財?shù)捻椖浚环N有效的藥物篩選體制迫切需要。目前，國內(nèi)尚未有類似的藥物篩選平臺。此平臺的建立將加快醫(yī)藥行業(yè)的發(fā)展，對提高人們生活水平，造福人類健康具有十分重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種干細胞藥物篩選方法。該方法評價方式簡單、便捷、高效。

本發(fā)明一種干細胞藥物篩選方法，步驟包括：

(1)將疾病模型的多能型誘導(dǎo)干細胞進行培養(yǎng)，再誘導(dǎo)成疾病成體細胞；

(2)將正常模型的多能型誘導(dǎo)干細胞進行培養(yǎng)，再誘導(dǎo)成正常成體細胞；

(3)將誘導(dǎo)產(chǎn)生的疾病成體細胞加入配制好的不同濃度的篩選藥物共同培養(yǎng)；檢測不同時間點經(jīng)篩選藥物培養(yǎng)的疾病成體細胞在細胞形態(tài)、細胞活力、細胞增值凋亡能力、細胞LDH和ATP水平、相應(yīng)基因蛋白表達、電生理上的變化情況，分析藥物對經(jīng)篩選藥物培養(yǎng)的疾病成體細胞的作用；

(4)將誘導(dǎo)產(chǎn)生的正常成體細胞加入配制好的不同濃度的篩選藥物共同培養(yǎng)；檢測不同時間點經(jīng)篩選藥物培養(yǎng)的正常成體細胞在細胞形態(tài)、細胞活力、細胞增值凋亡能力、細胞LDH和ATP水平、相應(yīng)基因蛋白表達、電生理上的變化情況，分析藥物對經(jīng)篩選藥物培養(yǎng)的正常成體細胞毒性作用；

若藥物對正常成體細胞無毒性作用，對疾病成體細胞有治療作用，則該藥物被篩選出；

若藥物對正常成體細胞無毒性作用，對疾病成體細胞無治療作用，則該藥物不被篩選出；

若藥物對正常成體細胞有毒性作用，對疾病成體細胞有治療作用，則該藥物需要進一步研究，根據(jù)結(jié)果決定是否能進入后期篩選；

若藥物對正常成體細胞有毒性作用，對疾病成體細胞無治療作用，則該藥物不被篩選出。

進一步的，步驟(2)中篩選藥物的配置，具體為：根據(jù)所需檢測的藥物的理化特性，將藥物進行溶解，配成用于細胞的藥物濃度梯度，濾菌后4℃儲存?zhèn)溆茫瑫r配對照樣。