[發(fā)明專利]子蓮的體外幼胚誘導和植株再生的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811239455.3
• 申請日: 2018-10-23
• 公開（公告）號: CN109302985B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發(fā)明（設計）人: 王蕓;劉玉平;彭靜;柯衛(wèi)東
• 申請（專利權）人: 武漢市農(nóng)業(yè)科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 武漢開元知識產(chǎn)權代理有限公司 42104
• 代理人: 俞鴻;馮超

本發(fā)明公開了一種子蓮的體外幼胚誘導和植株再生的方法，該方法首先將幼胚接種于蓮胚培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)3～4周，然后將誘導出的新生蓮胚組織轉接到蓮胚培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，在溫度為24～26℃條件下進行暗培養(yǎng)，再將繼代良好的蓮胚組織移至蓮胚培養(yǎng)基上進行光照培養(yǎng)最后將生長狀態(tài)良好且轉綠的蓮胚組織移至新的成苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成蓮試管苗；本發(fā)明能夠克服蓮遠緣雜交后代結實率低的問題，提高蓮遠緣雜交后代的存活率，在蓮遺傳改良和品種選育上有一定的應用價值。

技術領域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領域，具體涉及一種子蓮的體外幼胚誘導和植株再生的方法。

背景技術

蓮(Nelumbo nucifera Gaertn.)屬睡蓮科(Nymphaeaceae)蓮屬(Nelumbo Adans)植物，是一種多年生水生蔬菜類作物。蓮屬植物包括中國蓮(N.nucifera Gaertn.)和美洲黃蓮(N.lutea Pers.)兩個種。中國是蓮的起源中心之一，蓮在我國有著悠久的栽培和馴化歷史，中國古籍《詩經(jīng)》中就有“山有扶蘇，隰有荷華”、“彼澤之陂，有蒲與荷”的詩句。蓮的栽培面積廣泛，資源類型豐富，我國黃河以南及長江流域等地最適合蓮的生長(孔慶東，中國水生蔬菜品種資源，湖北科學技術出版社，2004:3)。

隨著人類的長期馴化，蓮逐漸分化為子蓮、藕蓮和花蓮三個類型。藕蓮和子蓮可供人類食用，花蓮可供觀賞，另外蓮的全株都可入藥，有極高的藥用價值，《本草綱目》記載“藕可交心腎，厚腸胃，固精氣，強筋骨，補虛損，利耳目，除寒濕，止脾泄”(孔慶東，中國水生蔬菜品種資源，湖北科學技術出版社，2004:3)。近20年來，國內外在蓮的園藝分類、生理生化、生長發(fā)育、組織培養(yǎng)及遺傳育種等方面做了相關研究(王蕓等，分子標記技術在蓮遺傳多樣性分析中的應用，長江蔬菜，2009(16):8-10)，特別是國內人員在蓮的組織培養(yǎng)上已做了許多工作，彭靜等利用藕蓮莖尖進行了蓮的組織培養(yǎng)和快速繁殖研究，成功誘導分化叢芽及蓮試管苗(彭靜等，蓮藕的組織培養(yǎng)與快速繁殖，植物生理學通訊，2001，37(1):38)，柯衛(wèi)東等利用藕蓮的莖尖成功誘導出試管藕(柯衛(wèi)東等，試管藕誘導技術研究，武漢植物學研究，2001，19(2):173-175)，周以飛等利用子蓮品種的幼嫩胚芽成功誘導出叢芽(周以飛等，不同生境型子蓮組培苗的快繁研究，植物生理學通訊，2005，41(2):184)，何子燦和劉士佳利用花蓮幼胚誘導出愈傷組織(何子燦和劉士佳，蓮胚愈傷組織誘導及植株再生的研究，水生生物學報，1987，11(3):278-280)。雖然蓮的組織培養(yǎng)技術已經(jīng)較為成熟，但仍存在以下缺點：

(1)采用的接種外植體多為蓮的莖尖，由于蓮根狀莖生長與泥土里，從根狀莖上取下的莖尖常帶有病菌，若消毒過程不徹底容易發(fā)生污染；

(2)蓮根狀莖挖取費時費力，一支蓮根狀莖上的莖尖個數(shù)有限，導致蓮莖尖組培和快繁的啟動效率較低，并且蓮的莖尖快繁系數(shù)很低；

(3)利用蓮幼胚作為外植體進行組培快繁，現(xiàn)階段僅停留在誘導出叢芽與生根，極少數(shù)能夠成苗，推廣應用受到限制。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供了一種子蓮的體外幼胚誘導和植株再生的方法，該方法實現(xiàn)了從蓮幼胚到蓮植株的培養(yǎng)全過程，成苗率達到50％以上。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所設計一種子蓮的體外幼胚誘導和植株再生的方法，包括以下步驟：

1)接種幼胚：以鄂子蓮1號正常開花授粉后3～5天的籽粒為材料，經(jīng)清洗消毒處理后，剝去外層表皮，切取幼胚(3～5天胚齡)接種于蓮胚培養(yǎng)基上，在溫度為24～26℃下進行暗培養(yǎng)3～4周，誘導得到新生蓮胚組織；其中，蓮胚培養(yǎng)基為MS基礎培養(yǎng)基+4.0～6.0mg/LNAA+0.4～0.6mg/L ZT+30.0g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH值為5.8～6.0；

2)繼代培養(yǎng)：將誘導出的新生蓮胚組織轉接到蓮胚培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，在溫度為24～26℃條件下進行暗培養(yǎng)3～4周，使蓮胚組織繼續(xù)生長；