[發(fā)明專利]一種利用遠(yuǎn)緣雜交的育種方法及基因庫構(gòu)建的方法

在審

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• 申請日: 2018-10-23
• 公開（公告）號: CN109197571A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張建宏;江振興;張素君;唐麗媛;李興河;王海濤;劉存敬;張香云
• 申請（專利權(quán)）人: 河北省農(nóng)林科學(xué)院棉花研究所(河北省農(nóng)林科學(xué)院特種經(jīng)濟作物研究所)
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

1.一種利用遠(yuǎn)緣雜交的育種方法，其特征在于，該方法包含：

(1)進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交：通過陸地棉、海島棉、野生棉、中棉進(jìn)行種間遠(yuǎn)緣雜交，獲得遠(yuǎn)緣雜交后代；

(2)遠(yuǎn)緣雜交后代快速純化：以半配合材料作母本，所述遠(yuǎn)緣雜交后代作父本，在F1代中檢測單倍體植株，進(jìn)行染色體加倍，獲得純合的遠(yuǎn)緣雜交后代；

(3)確定核心親本：確定種質(zhì)資源間的親緣關(guān)系，并根據(jù)親本組配和目標(biāo)性狀，以確定核心親本；

(4)抗蟲基因?qū)搿⒈磉_(dá)與抗蟲性篩選：將所述核心親本與抗蟲品種雜交，得到的F1代再與核心親本雜交，后代再自交、回交以分別獲得F2、BC1代，將F2、BC1代種植，采用田間蟲情調(diào)查和卡那霉素檢測相結(jié)合，進(jìn)行基因表達(dá)與抗蟲性篩選，獲得抗性植株，并對抗性植株在不同生育期、不同器官進(jìn)行表達(dá)量測定，選出前30％的強陽性植株，測定抗蟲基因；該強陽性植株為表達(dá)Bt殺蟲蛋白的植株；

(5)不同類型棉花選育：根據(jù)抗蟲性、抗病性、豐產(chǎn)性、早熟性、纖維品質(zhì)進(jìn)行綜合評判，按抗病類、優(yōu)質(zhì)類、豐產(chǎn)類、早熟類進(jìn)行分類；

其中，所述抗病性鑒定：以枯萎病指＜10，黃萎病指＜35為指標(biāo)；

其中，所述纖維品質(zhì)檢測：從F4代開始，進(jìn)行纖維檢測，以纖維上半部平均長度＞30mm、比強度＞30cN/tex、3.7＜馬克隆值＜4.9為指標(biāo)；

其中，所述豐產(chǎn)性鑒定：以皮棉增產(chǎn)率＞15％為指標(biāo)；

其中，所述早熟性鑒定：以形態(tài)特征、生物學(xué)特性評判早熟；

其中，所述抗蟲性鑒定植株的抗棉鈴蟲情況。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用遠(yuǎn)緣雜交的育種方法，其特征在于，在步驟(2)中，采用秋水仙堿以使所述染色體加倍。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用遠(yuǎn)緣雜交的育種方法，其特征在于，所述秋水仙堿的濃度為0.1％～0.3％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用遠(yuǎn)緣雜交的育種方法，其特征在于，在步驟(3)中，通過AFLP-PCR指紋圖譜檢測技術(shù)以評價、鑒定創(chuàng)新的種質(zhì)資源，確定種質(zhì)資源間的親緣關(guān)系。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用遠(yuǎn)緣雜交的育種方法，其特征在于，在步驟(4)中，在幼苗期時，采用濃度閾值為1500ppm的卡那霉素處理，去除不抗蟲植株，幼苗長大時，采用濃度閾值為2500ppm的卡那霉素處理，選出20％的抗性植株；

采用ELISA法和酶學(xué)法對所述抗性植株在不同生育期、不同器官進(jìn)行表達(dá)量測定，選出前30％的強陽性植株；

測定抗蟲基因采用PCR和分子雜交技術(shù)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用遠(yuǎn)緣雜交的育種方法，其特征在于，在步驟(5)中，所述抗病性鑒定：將所有親本及F1、F2、BC1代全部在病圃種植，連續(xù)單株定向選擇，生育期跟蹤調(diào)查，進(jìn)行枯黃萎病鑒定，結(jié)合后期生產(chǎn)鑒定結(jié)果，篩選抗病性品種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用遠(yuǎn)緣雜交的育種方法，其特征在于，在步驟(5)中，所述纖維品質(zhì)檢測還通過對鑒定品種的纖維品質(zhì)相關(guān)的QTL位點來源的SSR分子標(biāo)記追蹤，所述SSR標(biāo)記位點包含：第7號染色體的NAU1085和HAU1172區(qū)段和第13號染色體的BNL1421位點。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用遠(yuǎn)緣雜交的育種方法，其特征在于，在步驟(5)中，所述早熟性鑒定：以生育期≤125天，霜前花率≥90％為指標(biāo)。