[發明專利]一種工程菌及其在酪醇生產中的應用

有效

• 申請號: 201811234765.6
• 申請日: 2018-10-23
• 公開（公告）號: CN109370967B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 蔡宇杰;劉金彬;李朝智;丁彥蕊;白亞軍;鄭曉暉
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P7/22;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種大腸桿菌重組菌，其特征在于，所述重組菌以敲除了基因組上的hpaD和mhpB基因，并且通過序列如SEQ ID NO:8所示的啟動子PG強化表達了谷氨酸轉運基因gltS、NAD合成基因nadA、磷酸吡哆醛合成基因pdxJ的E.coli BL21(DE3)為表達宿主；采用pRSFDuet-1和pCDFDuet-1雙質粒共表達編碼4個酶的基因；pRSFDuet-1裝載L-α-氨基酸轉氨酶和L-谷氨酸脫氫酶，pCDFDuet-1裝載α-酮酸脫羧酶和醇脫氫酶；

所述L-α-氨基酸轉氨酶的氨基酸序列是NCBI上accession NO為YP_806114.1的序列；

所述L-谷氨酸脫氫酶的氨基酸序列是NCBI上accession NO為WP_010886557.1序列；

所述α-酮酸脫羧酶的氨基酸序列是NCBI上accession NO.為WP_025016816.1的序列；

所述醇脫氫酶的氨基酸序列是NCBI上accession NO.為WP_000692754.1的序列。

2.一種生產酪醇的方法，其特征在于，所述方法為，將權利要求1所述的大腸桿菌重組菌添加至含有谷氨酸和L-酪氨酸的反應體系中進行反應制備得到。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述大腸桿菌重組菌按照細胞濕重添加量為1-200g/L。

4.如權利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述L-谷氨酸的添加量為1-200g/L。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述L-酪氨酸的添加量為1-200g/L。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述反應體系中的反應條件為，pH 6.0-9.0；溫度為15-40℃，反應時間1-48小時。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述大腸桿菌重組菌的制備方法為：將重組大腸桿菌按體積比為2％的接種量轉接到LB發酵培養基中，當細胞OD₆₀₀達到0.6-0.8后，加入終濃度為0.4mM的IPTG進行誘導表達，制備得到大腸桿菌重組菌。