[發明專利]一種提取橡膠樹葉片總DNA的方法在審
| 申請號： | 201811230810.0 | 申請日： | 2018-10-22 |
| 公開（公告）號： | CN109136221A | 公開（公告）日： | 2019-01-04 |
| 發明（設計）人： | 黃關青;李冬青 | 申請（專利權）人： | 海南青峰生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 武漢智權專利代理事務所(特殊普通合伙) 42225 | 代理人： | 張凱 |
| 地址： | 570216 海南省海口市龍*** | 國省代碼： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 提取緩沖液 總DNA 多酚類物質 橡膠樹葉片 溶解 氯化鈉 聚乙烯吡咯烷酮 細胞質 預處理 葡萄糖 細胞核 低速離心 抗氧化劑 樣品分離 植物提取 巰基乙醇 復合物 裂解液 滲透性 穩定劑 裂解 | ||
1.一種提取橡膠樹葉片總DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：
取橡膠樹葉片，放在液氮中研成粉末后轉入離心管中，在離心管中加入預冷的提取緩沖液，低溫離心；
棄去上清液，沉淀中加入55～75℃預熱的裂解液，于55～75℃水浴中保溫；
加入等體積的酚∶氯仿∶異戊醇混合液，于室溫下離心；
上清液轉至另一新管中，加入異丙醇，于室溫下離心；
以乙醇洗沉淀，沉淀風干后，加入TE緩沖液，溶于微量離心管中，加入核糖核酸酶，于室溫下保溫；
加入等體積的氯仿∶異戊醇混合液，低溫離心；
棄去上清液，加入醋酸鈉，混勻后加入無水乙醇，翻轉混勻，于-15℃～-25℃中靜置；
低溫離心，用乙醇洗沉淀，沉淀風干后，將沉淀溶于TE緩沖液中，于-15℃～-25℃下保存。
2.如權利要求1所述的一種提取橡膠樹葉片總DNA的方法，其特征在于：橡膠樹葉片與提取緩沖液比例為1∶5～1∶7。
3.如權利要求1所述的一種提取橡膠樹葉片總DNA的方法，其特征在于：所述提取緩沖液為0.45M的葡萄糖、0.1mM的Tris-HCl、5mM的EDTA、2％質量濃度的聚乙烯吡咯烷酮和2％物質濃度的β-巰基乙醇。
4.如權利要求1所述的一種提取橡膠樹葉片總DNA的方法，其特征在于：所述裂解液為2％質量濃度的CTAB、2％質量濃度的聚乙烯吡咯烷酮、1.4M的NaCl、20mM的EDTA、0.1M的Tris-HCl和2％物質濃度的巰基乙醇。
5.如權利要求1所述的一種提取橡膠樹葉片總DNA的方法，其特征在于：所述TE緩沖液為10mM的Tris-HCl和1mM的EDTA。
6.如權利要求3～5任意一項所述的一種提取橡膠樹葉片總DNA的方法，其特征在于：所述Tris-HCl的PH值為7.1～8.0。
7.如權利要求3～5任意一項所述的一種提取橡膠樹葉片總DNA的方法，其特征在于：所述EDTA的PH值為7.1～8.0。
8.如權利要求1所述的一種提取橡膠樹葉片總DNA的方法，其特征在于：所述酚∶氯仿∶異戊醇混合液中酚∶氯仿∶異戊醇的體積比為25∶24∶1。
9.如權利要求1所述的一種提取橡膠樹葉片總DNA的方法，其特征在于：所述氯仿∶異戊醇混合液中氯仿∶異戊醇的體積比為24∶1。
10.如權利要求1所述的一種提取橡膠樹葉片總DNA的方法，其特征在于：所述醋酸鈉濃度為3mol/L。
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