[發(fā)明專利]一種里氏木霉基因工程菌及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811230759.3
• 申請日: 2018-10-22
• 公開（公告）號(hào): CN109486688B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林鳳鳴;李程程;楊子華源
• 申請（專利權(quán)）人: 東南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/15
• 分類號(hào): C12N1/15;C12N15/80;C12P17/06;C12R1/885
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 黃欣

本發(fā)明公開了一株組成型高產(chǎn)Sorbicillinoids里氏木霉基因工程菌及其制備方法和應(yīng)用，該里氏木霉基因工程菌，其分類命名為叢梗孢目（Moniliales）木霉屬（Penicillium）絲狀真菌里氏木霉（Trichoderma reesei），菌株號(hào)ZC121，已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC M 2018385，保藏日期為2018年06月20日。該菌株ZC121是在里氏木霉Rut?C30中敲除基因121121發(fā)生脫靶效應(yīng)得到，可用于生產(chǎn)大量Sorbicillinoids。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株組成型高產(chǎn)Sorbicillinoids里氏木霉基因工程菌及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

Sorbicillinoids通常也被稱作黃色色素，來源于聚酮類化合物及一些在羧基末端具有環(huán)化結(jié)構(gòu)的己酮類次級(jí)代謝產(chǎn)物，通常由一些海洋或陸地的絲狀真菌產(chǎn)生，比如：木霉屬(Appl Environ Microbio.2016；82:6247-57)、曲霉屬(Microbiol Res.2010；165:516-22)、青霉屬 (Tetrahedron.2005；61:7252-65)、鏈霉菌屬(Proc Natl Acad SciUSA.2001；98:12215-20)、支頂孢屬(Tetrahedron Lett.1994；35:2577-80)、擬青霉屬(Tetrahedron Lett.2008；49:654-57)，這些化合物大部分具有復(fù)雜的、高度氧化的C1-C6山梨酰基側(cè)鏈和兩個(gè)或三個(gè)循環(huán)結(jié)構(gòu)。基于這樣的結(jié)構(gòu)，Sorbicillinoids類化合物可以分成四類：單體類的Sorbicillinoids，雙元的 BiSorbicillinoids，三元的TriSorbicillinoids和雜合的Sorbicillinoids。它們具有多種生物活性，包括抗癌(J NatProd.2010；73:969-71)、抗氧化(Chem Commun.2002；662-3)、抗病毒(J Nat Prod.2014；77:424-8)、抗菌作用(J Nat Prod.2005；68:865-70)，顯示出了在農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥和食品工業(yè)上的重要應(yīng)用。因此，雖然這些物質(zhì)最開始在真菌發(fā)酵生產(chǎn)β-lactams(Appl Enviro.Microbiol.2016；82:3971-78)和纖維素酶(Appl Environ Microbio.2016；82:6247-57)時(shí)希望被去除，但是這些黃色色素類物質(zhì)仍吸引了人們極大的興趣。

關(guān)于Sorbicillinoids的研究主要集中在里氏木霉和青霉菌。里氏木霉作為工業(yè)上生產(chǎn)纖維素酶、半纖維素酶以及其他重組蛋白的主要工業(yè)化菌株(TrendsBiotechnol.2016；34:970-82)，它同時(shí)也能夠產(chǎn)生豐富的次級(jí)代謝產(chǎn)物(Microbiology.2012；158:35-45),但是卻很少引起人們注意。人們觀察到里氏木霉在生長過程中會(huì)產(chǎn)生黃色色素(Eur J Biochem.1996；235:248-55), 隨后這些黃色物質(zhì)被鑒定為Sorbicillin，Sorbicillinol和Soribicilloinds的混合物(Front Microbiol.2017；8.Technical University of Denmark.2013；164.Appl Environ Microbio.2016；82:6247-57)。人們猜測在產(chǎn)黃青霉(Microb Biotechnol.2017；10:958-68)和里氏木霉(FrontMicrobiol.2017；8)的產(chǎn)Sorbicillinoids類物質(zhì)的合成路徑中，所有基因和次級(jí)代謝中所涉及到的基因一樣在基因組上是聚成簇的(Microbiol.2016；82:3971-78)。該基因簇也包含兩個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子YPR1和YRP2以及一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)因子(Appl Environ Microbio.2016；82:6247-57)。然而， Sorbicillinoids類物質(zhì)的合成仍然不是很清楚，并且也缺少提高Sorbicillinoids產(chǎn)量的相關(guān)研究。

發(fā)明內(nèi)容