[發(fā)明專利]一種基于ITGB5基因的膠質母細胞瘤輔助診斷、預后評價試劑盒及其使用方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811229708.9 | 申請日： | 2018-10-22 |
| 公開（公告）號： | CN109182528B | 公開（公告）日： | 2020-12-29 |
| 發(fā)明（設計）人： | 吳安華;程鵬;郭清;管格非;曹靖元 | 申請（專利權）人： | 中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12Q1/6886 | 分類號： | C12Q1/6886;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107 | 代理人： | 史力伏 |
| 地址： | 110001 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 itgb5 基因 膠質 細胞 輔助 診斷 預后 評價 試劑盒 及其 使用方法 | ||
1.一種ITGB5基因在制備膠質母細胞瘤輔助診斷、預后評價試劑盒中的應用，其特征在于，包括擴增ITGB5基因的PCR引物對，所述引物對為：
正向引物序列為5’-GGAAGTTCGGAAACAGAGGGT-3’
反向引物序列為5’-CTTTCGCCAGCCAATCTTCTC-3’。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述試劑盒還包括擴增管家基因GAPDH的PCR引物對，所述引物對為：
正向引物序列為5’-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3’
反向引物序列為5’-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3’。
3.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述試劑盒包括SYBR Green聚合酶鏈式反應體系，所述SYBR Green聚合酶鏈式反應體系包括PCR緩沖液、dNTPs、SYBR Green熒光染料、無酶水和熒光定量加樣板。
4.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述試劑盒包括RNA提取試劑，所述RNA提取試劑包含Trizol、氯仿、異丙醇、75％乙醇和RNase free 水。
5.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述試劑盒包括將mRNA反轉錄為cDNA的體系，該反轉錄試劑5 X RT master mix 為PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、Random 6mers、Oligo dT Primer 、dNTP Mixture、反應 Buffer，熒光定量PCR反應體系SYBR PremixEx TaqTM。
6.如權利要求1所述的應用，其特征在于，試劑盒的使用方法具體包括以下步驟：
(1)將獲取的新鮮組織經過液氮處理研磨后進行RNA抽提；
(2)將抽提出的RNA反轉錄成對應的cDNA；
(3)將反轉錄后的cDNA進行對ITGB5和GAPDH基因的熒光定量PCR擴增；
(4)以GAPDH作為內參，記錄每個反應的Ct值，檢測結果以-ΔCt表示，其中ΔCt＝CtGene-CtGAPDH。
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