[發明專利]乙肝肝炎病毒功能性受體的組成以及相關應用

有效

• 申請號: 201811226868.8
• 申請日: 2012-04-25
• 公開（公告）號: CN109354623B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 李文輝;嚴歡;鐘國才;徐廣偉;何文輝;隋建華;景志毅;黃屹
• 申請（專利權）人: 華輝安健（北京）生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C12N15/12;C12N5/10;C12N15/867;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 北京睿陽聯合知識產權代理有限公司 11758
• 代理人: 張穎

1.分離的蛋白質作為乙型肝炎病毒HBV或丁型肝炎病毒HDV的功能性受體的用途，所述分離的蛋白質為人NTCP蛋白或樹鼩NTCP蛋白，所述人NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述樹鼩NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.一種易受HBV或HDV感染的細胞，所述細胞中外源轉入了編碼人NTCP蛋白或樹鼩NTCP蛋白的分離的核苷酸，所述人NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述樹鼩NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.根據權利要求2所述的易受HBV或HDV感染的細胞，所述易受HBV或HDV感染的細胞在轉入權利要求2中所述的核苷酸序列前是不易受HBV或HDV感染的細胞。

4.根據權利要求3所述的易受HBV或HDV感染的細胞，所述不易受HBV或HDV感染的細胞選自失去HBV或HDV感染敏感性的原代人肝細胞或原代樹鼩肝細胞，人或樹鼩肝癌細胞，小鼠或大鼠肝細胞。

5.根據權利要求3所述的易受HBV或HDV感染的細胞，所述不易受HBV或HDV感染的細胞為肝癌細胞Huh-7或HepG2。

6.根據權利要求2所述的易受HBV或HDV感染的細胞，所述易受HBV或HDV感染的細胞是外源轉入編碼權利要求1中所述的HBV或HDV的功能性受體的分離的核苷酸的小鼠或大鼠的肝細胞。

7.編碼人NTCP蛋白或樹鼩NTCP蛋白的載體在構建乙型肝炎病毒和/或丁型肝炎病毒感染的非人轉基因動物模型中的應用，所述人NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述樹鼩NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

8.建立乙型肝炎病毒感染和/或丁型肝炎病毒感染的非人轉基因動物模型的方法，所述方法包括通過轉基因技術將受體非人動物的原SLC10A1基因替換為表達外源人類SLC10A1基因或樹鼩SLC10A1基因的基因敲入小鼠；或者所述方法包括首先基因敲除受體非人動物的SLC10A1基因，然后進一步改造成表達來自人類的SLC10A1基因、或來自樹鼩的SLC10A1基因。

9.權利要求7所述的應用或權利要求8所述的方法，其中所述的非人轉基因動物是非人哺乳動物。

10.權利要求7所述的應用或權利要求8所述的方法，其中所述的非人轉基因動物是小鼠、大鼠、非人靈長類動物。

11.用于篩選治療和/或預防HBV和/或HDV感染或感染相關疾病的藥物的方法，所述方法包括使用權利要求2-6任一項限定的細胞或由權利要求8的方法建立的非人轉基因動物模型。

12.用于篩選治療和/或預防HBV和/或HDV感染或感染相關疾病的藥物的方法，所述方法包括使用穩定表達人NTCP蛋白或樹鼩NTCP蛋白的Huh-7或HepG2細胞系，所述人NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述樹鼩NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

13.權利要求2-6任一項限定的細胞或由權利要求8的方法建立的非人轉基因動物模型在篩選治療和/或預防HBV和/或HDV感染或感染相關疾病的藥物中的應用。

14.穩定表達人NTCP蛋白或樹鼩NTCP蛋白的Huh-7或HepG2細胞系在篩選治療和/或預防HBV和/或HDV感染或感染相關疾病的藥物中的應用，所述人NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQID NO：1所示，所述樹鼩NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

15.用于治療或預防哺乳動物乙型肝炎病毒和/或丁型肝炎病毒感染以及相關疾病的藥物，所述藥物阻止或減少NTCP的蛋白質表達，或者所述藥物阻止或減少NTCP與HBV和/或HDV之間的相互作用，所述藥物為siRNA，所述siRNA為選自如下的序列：

siRNA-1：5'-CUAUGUAGGCAUUGUGAUAdTdT-3'(SEQ ID NO: 4)，

siRNA-2：5'-GUGUUAUCCUGGUGGUUAUdTdT-3'(SEQ ID NO: 5)，

siRNA-3：5'-GGACAUGAAUCUCAGCAUUdTdT-3'(SEQ ID NO: 6)，

siRNA-4：5'-GGGCAAGAGCAUCAUGUUUdTdT-3'(SEQ ID NO: 7)，

siRNA-11：5'-GGGAAAUGGCACCUACAAAdTdT-3'(SEQ ID NO: 8)，

siRNA-405：5'-CACAAGUGCUGUAGAAUUAdTdT-3'(SEQ ID NO: 9)，

siRNA-406：5'-CUAUAAAGGCAUCGUGAUAdTdT-3'(SEQ ID NO: 10)，

siRNA-pool(4)：5'-GGAUCGUCCUCAAAUCCAAdTdT-3'(SEQ ID NO: 11)，

siRNA-pool(5)：5'-GGAGUCAGCCGGAGAACAAdTdT-3'(SEQ ID NO: 12)，

siRNA-pool(6)：5'-GGACAAGGUGCCCUAUAAAdTdT-3'(SEQ ID NO: 13)，

siRNA-pool(7)：5'-GGUGCUAUGAGAAAUUCAAdTdT-3'(SEQ ID NO: 14)。