[發明專利]一種1-(4-溴苯基)-5-苯基-1H-三唑與血清作用的差異蛋白檢測方法

有效

• 申請號: 201811226273.2
• 申請日: 2018-10-19
• 公開（公告）號: CN109187406B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 何文英;馮華杰;陳光英;劉榮強;吳祿勇;段紅葉
• 申請（專利權）人: 海南師范大學
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N27/447;G01N33/68
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 于躍

1.一種1-(4-溴苯基)-5-苯基-1H-1,2,3-三唑與血清作用檢測差異蛋白的方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)將血清蛋白與1-(4-溴苯基)-5-苯基-1H-1,2,3-三唑化合物溶液混合均勻得樣品a，恒溫培養得樣品b；

(2)去除樣品b中的高豐度蛋白得樣品c；

(3)用Bradford法對樣品c的蛋白濃度進行定量；

(4)進行雙向電泳實驗

①按每膠條蛋白質上樣量1.3mg，上樣總體積為455uL的標準水化上樣，進行第一向等電聚焦；

②第一向等電聚焦完畢后，將膠條平衡后轉到聚丙烯酰胺凝膠進行第二垂直電泳實驗；

③電泳結束后進行考馬斯亮藍染色，脫色，保存，掃描分析；

(5)膠片圖像處理及質譜鑒定

①凝膠圖像分析，篩選出表達異常的蛋白點并做上標記；

②差異蛋白點的酶解及質譜鑒定；

(6)結果

利用ImageMaster5.0凝膠圖像分析軟件獲得18個差異表達蛋白質點，再通過NCBInr的Blast的檢索，確定了其中1-16號差異表達蛋白的信息見下表，

。

2.權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中1-(4-溴苯基)-5-苯基-1H-1,2,3-三唑化合物溶液為1-(4-溴苯基)-5-苯基-1H-1,2,3-三唑化合物的甲醇溶液，樣品a中1-(4-溴苯基)-5-苯基-1H-1,2,3-三唑化合物的濃度為2.0×10^-3mol/L。

3.權利要求1-2任一項所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中恒溫培養：溫度為37℃，轉速為r＝280rpm，時間為1h。

4.權利要求1所述的方法，其特征在于所述血清蛋白選自人血清蛋白。

5.權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中去除高豐度蛋白的方法為按照AndyBio試劑盒要求去除高豐度蛋白。

6.權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(4)中膠條規格為24cm非線性IPG膠條IPG pH＝3～10NL。

7.1-(4-溴苯基)-5-苯基-1H-1,2,3-三唑在與血清蛋白作用確定差異蛋白中的應用，其特征在于所述1-(4-溴苯基)-5-苯基-1H-1,2,3-三唑的制備方法包括如下步驟：室溫下，將1-疊氮基-4-溴代苯與苯乙烯溶于有機溶劑中，加入SmI₂，攪拌反應2.5小時后得到1-(4-溴苯基)-5-苯基-1H-1,2,3-三唑；所述有機溶劑為THF與HMPA體積比為1:1的混合溶液；1-疊氮基-4-溴代苯、苯乙烯、SmI₂的摩爾比為1：1.0-1.2：2.0。