[發(fā)明專(zhuān)利]一種微孔膜截留的微流體芯片及其溶液流路控制的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811224518.8
• 申請(qǐng)日: 2018-10-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109158136B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬校衛(wèi);常曉依;周中人
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海快靈生物工程有限公司;上海快靈生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): B01L3/00
• 分類(lèi)號(hào): B01L3/00
• 代理公司: 南京禹為知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 王曉東

本發(fā)明公開(kāi)了一種微孔膜截留的微流體芯片及其溶液流路控制的方法，包括第一樣品區(qū)；連通流路；第一反應(yīng)區(qū)，通過(guò)所述連通流路與所述第一樣品區(qū)相連接，包括第一排氣端、第一出液端和第一進(jìn)液端，所述第一排氣端設(shè)于所述第一反應(yīng)區(qū)朝向芯片旋轉(zhuǎn)離心中心點(diǎn)的頂部，所述第一出液端置于所述第一反應(yīng)區(qū)的中心底部，所述第一進(jìn)液端設(shè)于所述第一反應(yīng)區(qū)的邊緣區(qū)域。本發(fā)明減少了實(shí)驗(yàn)中試劑的反應(yīng)時(shí)間，通過(guò)微流通道減少了樣本的使用量，降低了使用成本，操作改進(jìn)了實(shí)驗(yàn)者隔一段時(shí)間滴加試劑的方式，無(wú)需操作者一直守在實(shí)驗(yàn)儀器旁觀測(cè)等待，減少了人工成本，操作更為一體化、人性化，最后采集時(shí)通過(guò)熒光檢測(cè)，方便快捷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物反應(yīng)檢測(cè)分析中使用的樣品分析微流體芯片，尤其涉及一種高效的微孔膜截留的微流體芯片及其溶液流路控制的方法。

背景技術(shù)

免疫分析技術(shù)是其利用抗原與抗體之間高特異性產(chǎn)生的識(shí)別和結(jié)合反應(yīng)實(shí)現(xiàn)生物分子的檢測(cè)，具備靈敏度高、特異性強(qiáng)、適用面廣、所需設(shè)備簡(jiǎn)單、線性范圍較寬等優(yōu)點(diǎn)，已成為當(dāng)今最具競(jìng)爭(zhēng)力和挑戰(zhàn)性的分析測(cè)試技術(shù)之一，在生命科學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)以及環(huán)境、食品、藥物等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。免疫標(biāo)記分析技術(shù)主要包括：放射物標(biāo)記、酶標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、熒光標(biāo)記等方法。用放射物標(biāo)記抗原或抗體發(fā)展的放射免疫分析(radio immunoassay,RIA)是美國(guó)科學(xué)Yalow和Berson于1959年創(chuàng)立的一種微量分析法,它是將具有高靈敏度的放射性核素示蹤技術(shù)和特異性免疫化學(xué)技術(shù)相結(jié)合而建立的新方法。該技術(shù)利用核素標(biāo)記物的放大效應(yīng),改善了待測(cè)物的檢測(cè)下限,同時(shí)以抗體或抗原作為結(jié)合試劑,大大提高了檢測(cè)方法的特異性。

以熒光標(biāo)記的熒光免疫分析(fluorescein immunoassay,FIA)是由Conn等首創(chuàng)于20世紀(jì)40年代的一種標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù),其所用標(biāo)記物是熒光素和熒光染料,是將抗原或抗體標(biāo)記以熒光物質(zhì)與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合,在熒光顯微鏡或紫外線照射下,檢測(cè)熒光強(qiáng)度和熒光現(xiàn)象的一種檢測(cè)方法。熒光標(biāo)記免疫法靈敏度高,但熒光素常會(huì)產(chǎn)生生物學(xué)毒性,導(dǎo)致抗體或抗原的靈敏度和選擇性下降

酶標(biāo)記分析技術(shù)是繼免疫熒光抗體技術(shù)和放射免疫分析之后發(fā)展起來(lái)的一大新型的血清學(xué)技術(shù)。1966年，Nakane等和Avrameas等分別報(bào)道用酶代替熒光素標(biāo)記抗體，建立了酶標(biāo)抗體技術(shù)(enzyme-labelled antibody technique)，用于生物組織中抗原的定位和鑒定。1971年，Engvall Van Weemen等報(bào)道了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，從而建立了酶標(biāo)抗體的定量檢測(cè)技術(shù)。20世紀(jì)80年代，基于酶標(biāo)記抗體檢測(cè)和鑒定蛋白質(zhì)分子的免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)問(wèn)世。目前，免疫酶標(biāo)記技術(shù)已成為免疫診斷、檢測(cè)和分子生物學(xué)研究中應(yīng)用最廣泛的免疫學(xué)方法之一。

發(fā)光標(biāo)記分析是20世紀(jì)80年代末,國(guó)外開(kāi)始用化學(xué)發(fā)光試劑來(lái)標(biāo)記抗原或抗體,從而建立了發(fā)光免疫分析技術(shù)。狹義的發(fā)光免疫分析(LIA)主要是指化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)。另外,還有酶放大化學(xué)發(fā)光免疫分析和電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECLIA)。CLIA是Sohrocler和Halman在20世紀(jì)70年代末期建立的,該方法兼有發(fā)光分析的高靈敏度和免疫反應(yīng)的特異性。其基本原理同酶標(biāo)記分析法,是用化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的試劑(可以是發(fā)光劑或催化劑等)標(biāo)記抗原或抗體，標(biāo)記后的抗原和抗體與待測(cè)物經(jīng)過(guò)一系列的免疫反應(yīng)和理化步驟(如離心分離、洗滌等),最后以測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度形式測(cè)定。

目前免疫分析技術(shù)主要采用以微孔板為實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的非均相分析模式，需要包埋、洗脫、分離等多步操作，分析過(guò)程繁瑣，分析時(shí)間長(zhǎng)，不能滿(mǎn)足快速檢測(cè)和診斷的要求。

生物反應(yīng)中通過(guò)微孔膜進(jìn)行不同分子量的蛋白及微粒微球的穿越，是一個(gè)很常用的技術(shù)手段，尤其是在蛋白純化中常用的離心濾管。但離心濾管一般是溶液手動(dòng)加入，離心后添加復(fù)溶液將穿越的蛋白溶解回收。