[發(fā)明專(zhuān)利]納米合成酶在細(xì)胞中促進(jìn)高分子透明質(zhì)酸合成的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811222988.0
• 申請(qǐng)日: 2018-10-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109276712B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 龍星;徐純;郭慧琳;李慧敏;李健;蔡恒星;孟慶功;房維;柯金;李穎杰;江恒華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K38/45
• 分類(lèi)號(hào): A61K38/45;A61K9/51;A61K47/32;A61K47/04;A61P19/02;A61P29/00
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專(zhuān)利代理有限公司 42102
• 代理人: 唐萬(wàn)榮;徐曉琴

本發(fā)明屬于滑液技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種納米合成酶在細(xì)胞中促進(jìn)高分子透明質(zhì)酸合成的應(yīng)用。所述納米合成酶為納米顆粒?透明質(zhì)酸合成酶負(fù)載體系，所述應(yīng)用為將納米顆粒?透明質(zhì)酸合成酶負(fù)載體系注射入關(guān)節(jié)腔內(nèi)，納米顆粒?透明質(zhì)酸合成酶負(fù)載體系進(jìn)入滑膜細(xì)胞，從而促進(jìn)滑膜細(xì)胞分泌高分子量透明質(zhì)酸。本發(fā)明通過(guò)將裝載透明質(zhì)酸合成酶的納米顆粒轉(zhuǎn)入滑膜細(xì)胞中，使滑膜細(xì)胞分泌更多高分子量的透明質(zhì)酸，本發(fā)明所產(chǎn)生的內(nèi)源性、自身合成的高分子量透明質(zhì)酸非常具有好的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用前景，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射納米顆粒?透明質(zhì)酸合成酶負(fù)載體系對(duì)于高效化治療骨性關(guān)節(jié)炎提供了新的手段，為臨床治療提供新的方法和思路。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于滑液技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種納米合成酶在細(xì)胞中促進(jìn)高分子透明質(zhì)酸合成的應(yīng)用。

背景技術(shù)

透明質(zhì)酸(hyaluronic acid，HA)，是Meyer和Palmer于1934年最先從牛眼玻璃體中分離出來(lái)的一種高粘性物質(zhì)。

人體中關(guān)節(jié)滑液是由關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞分泌，滑液覆蓋在關(guān)節(jié)表面。HA是構(gòu)成關(guān)節(jié)滑液的主要成分，對(duì)關(guān)節(jié)生理功能的發(fā)揮起著至關(guān)重要的作用。當(dāng)發(fā)生骨性關(guān)節(jié)炎(OA)、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)等疾病時(shí)，HA在關(guān)節(jié)內(nèi)的產(chǎn)生和代謝發(fā)生異常，滑液中HA的濃度和相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)明顯降低，軟骨發(fā)生降解和破壞，導(dǎo)致關(guān)節(jié)生理障礙。目前臨床上應(yīng)用透明質(zhì)酸進(jìn)行關(guān)節(jié)病的關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療，旨在通過(guò)補(bǔ)充外源性HA，恢復(fù)滑液的潤(rùn)滑功能，促進(jìn)軟骨的修復(fù)，改善關(guān)節(jié)功能。

迄今為止，大量的臨床研究使用結(jié)果表明，HA對(duì)OA、RA等關(guān)節(jié)疾病治療效果明確、安全，具有很好的臨床應(yīng)用前景。但是，外源性的HA在體內(nèi)降解速度比較快，通常在注射進(jìn)入關(guān)節(jié)腔后12到24小時(shí)內(nèi)就會(huì)被透明質(zhì)酸酶所降解。HA的降解物會(huì)啟動(dòng)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，引導(dǎo)血管生成，促進(jìn)炎癥反應(yīng)。

骨性關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是關(guān)節(jié)退行性疾病，研究已證實(shí)與炎癥密切相關(guān)，透明質(zhì)酸合成酶合成的透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)分子量降低是其重要的改變之一。臨床上關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射高分子HA被廣泛應(yīng)用于治療OA，能夠起到緩解疼痛以及潤(rùn)滑關(guān)節(jié)的作用。由于外源性HA降解速度快，且短期多次注射HA增加患者身心痛苦。隨著材料學(xué)和納米科技的發(fā)展，特制的納米顆粒由于其具有生物相容性好、較好的藥物緩釋控制，孔徑尺寸可調(diào)以及表面易于有機(jī)基團(tuán)改性等優(yōu)點(diǎn),被認(rèn)為是最有前景的藥物載體之一，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于抗腫瘤、藥學(xué)等方面的研究中，但在關(guān)節(jié)疾患領(lǐng)域尚無(wú)報(bào)道。

目前，HA原料普遍采用的生產(chǎn)方法主要有兩種一種是從動(dòng)物組織中提取；另一種是微生物發(fā)酵法。提取法主要利用雞冠、人臍帶、牛眼的玻璃體等為原料進(jìn)行生產(chǎn)，而且組織必須是新鮮采集，但動(dòng)物組織來(lái)源困難，且價(jià)格昂貴，成本高，這給HA的生產(chǎn)帶來(lái)了一定的困難；發(fā)酵法生產(chǎn)HA，是利用鏈球菌將廉價(jià)的葡萄糖轉(zhuǎn)化為HA，該方法不依賴于動(dòng)物器官，產(chǎn)量不受限制，但HA的產(chǎn)量不高，生物相容性不如前者。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)外源性透明質(zhì)酸的來(lái)源、生物相容性、理化性能及產(chǎn)量等方面的不足，目的在于提供一種納米合成酶在細(xì)胞中促進(jìn)高分子透明質(zhì)酸合成的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種納米合成酶在細(xì)胞中促進(jìn)高分子透明質(zhì)酸合成的應(yīng)用，所述納米合成酶為納米顆粒-透明質(zhì)酸合成酶負(fù)載體系，所述應(yīng)用為將納米顆粒-透明質(zhì)酸合成酶負(fù)載體系注射入關(guān)節(jié)腔內(nèi)，納米顆粒-透明質(zhì)酸合成酶負(fù)載體系進(jìn)入滑膜細(xì)胞，促進(jìn)滑膜細(xì)胞分泌高分子量透明質(zhì)酸。

上述方案中，所述納米顆粒-透明質(zhì)酸合成酶負(fù)載體系的制備方法包括如下步驟：1)將納米顆粒進(jìn)行表面聚乙烯亞胺改性修飾處理，隨后將其配制成納米顆粒溶液；2)將納米顆粒溶液與透明質(zhì)酸合成酶溶液混合，輕柔震蕩培養(yǎng)一段時(shí)間，然后離心分離，收集沉淀物，即得到負(fù)載透明質(zhì)酸合成酶的納米顆粒負(fù)載體系。

上述方案中，所述納米顆粒的粒徑為100～200nm，孔徑為10～60nm。