[發明專利]一種用于輔助診斷SCA3/MJD的外泌體生物標志物及其篩選鑒定方法

有效

• 申請號: 201811222136.1
• 申請日: 2018-10-19
• 公開（公告）號: CN109266737B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 江泓;侯曉燦;陳召;裘嶸;唐北沙
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113
• 代理公司: 長沙市標致專利代理事務所(普通合伙) 43218
• 代理人: 徐邵華

1.一種用于輔助診斷SCA3/MJD的外泌體生物標志物，其特征在于，所述外泌體生物標志物為外泌體來源的novel-mir-7014,所述novel-mir-7014的核苷酸序列SEQ ID NO.1所示。

2.如權利要求1所述的用于輔助診斷SCA3/MJD的外泌體生物標志物的篩選鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

1） 收集血漿、腦脊液樣本，并提取樣本中的外泌體及外泌體RNAs，并鑒定外泌體；

2） 應用sRNA Seq技術對步驟1）提取得到的外泌體Small RNAs進行測序，并篩選出差異性表達的miRNAs；

3） 擴大收集血漿樣本，并提取樣本中的外泌體RNAs；

4） 采用qPCR分析方法檢測miRNAs的相對表達水平，對篩選的miRNAs進行驗證性評估。

3.如權利要求2所述用于輔助診斷SCA3/MJD的外泌體生物標志物的篩選鑒定方法，其特征在于，在步驟2）和3）之間還包括對novel-mir-7014進行GO注釋和KEGG代謝通路分析。

4.如權利要求2所述用于輔助診斷SCA3/MJD的外泌體生物標志物的篩選鑒定方法，其特征在于，步驟4）中qPCR分析方法的具體操作為：

a）制備逆轉錄的反應混合液，將miRNAs逆轉錄為cDNAs；

b）通過Primer 5設計引物；

c）制備qPCR反應體系，使用U6作為標準化內參，進行qPCR分析，采用-△CT法進行miRNAs的相對表達含量分析。

5.如權利要求4所述用于輔助診斷SCA3/MJD的外泌體生物標志物的篩選鑒定方法，其特征在于，所述novel-mir-7014的正向引物的序列為CCTGTGTTCCTGAGCCTTG。

6.如權利要求1-5任一項所述用于輔助診斷SCA3/MJD的外泌體生物標志物在制備SCA3/MJD輔助診斷試劑盒中的應用。