[發明專利]誘導星形膠質細胞轉分化為五羥色胺能神經元的方法及應用

在審

• 申請號: 201811221705.0
• 申請日: 2018-10-19
• 公開（公告）號: CN111073855A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 程樂平;韓素娥;王毅;劉月光;袁嘉成
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12Q1/02;A61K35/30;A61P25/00;A61P25/28;A61P25/24;A61P25/18;A61P25/16
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種誘導星形膠質細胞轉分化為五羥色胺能神經元的方法，包括：在星形膠質細胞中表達選自下組的轉錄因子：(a)Ascl1/Mash1，Gata2，Foxa2，Lmx1b和Nkx2.2；或(b)Ascl1/Mash1，Gata2，Foxa2和Lmx1b；培養該細胞，從而所述星形膠質細胞轉分化為五羥色胺能神經元。

2.一種誘導星形膠質細胞轉分化為五羥色胺能神經元的方法，包括：

(1)在星形膠質細胞中表達以下轉錄因子：Ascl1/Mash1，Gata2，以及選自Foxa2、Lmx1b和Nkx2.2中的任意兩種或三種；

(2)在添加化合物的條件下誘導培養(1)的細胞，從而所述星形膠質細胞轉分化為五羥色胺能神經元；其中，所述化合物包括：Y27632，PD0332991，神經營養因子GDNF，神經營養因子BDNF，Dorsomorphin，SB431542。

3.如權利要求2的方法，其特征在于，所述的Dorsomorphin，SB431542在誘導培養的前9±2天，較佳地前9±1天添加。

4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的化合物的終濃度為：

Y27632：10±5μM，較佳地10±2μM；

PD0332991：1±0.5μM，較佳地1±0.2μM；

神經營養因子GDNF：20±10ng/ml，較佳地20±5ng/ml；

神經營養因子BDNF：20±10ng/ml，較佳地20±5ng/ml；

Dorsomorphin：0.5±0.25μM，較佳地0.5±0.15μM；

SB431542：5±2.5μM，較佳地5±1.5μM。

5.如權利要求2所述的方法，其特征在于，誘導培養的培養基中，還包括：B27添加物、血清、上皮生長因子EGF、成纖維細胞生長因子FGF2。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，各組分的終濃度為：

血清：按照體積10±5％；較佳地10±2％；

上皮生長因子EGF：10±5ng/ml；較佳地10±2ng/ml；

成纖維細胞生長因子FGF2：10±5ng/ml；較佳地10±2ng/ml；

B27添加物：1±0.5倍量。

7.如權利要求2～6任一所述的方法，其特征在于，所述的細胞培養基中，以選自下組的培養基作為基礎培養基：DMEM、MEM、RPMI、Neuronal basal或Fischer；較佳地，所述的DMEM選自：DMEM/F12，Advanced DMEM/F12。

8.由權利要求1～7任一所述的方法獲得的五羥色胺能神經元培養物或從該五羥色胺能神經元培養物中分離純化的五羥色胺能神經元。

9.如權利要求8所述的五羥色胺能神經元培養物或分離純化的五羥色胺能神經元，其特征在于，所述的五羥色胺能神經元通過在星形膠質細胞中表達權利要求1的(b)組的轉錄因子而獲得，其具有下組的性能或特征：呈現不成熟的電生理特性；或

所述的五羥色胺能神經元通過在星形膠質細胞中表達權利要求1的(a)組的轉錄因子而獲得，其具有下組的性能或特征：呈現成熟的電生理特性，產生復雜的神經元形態和電生理特性；或

所述的五羥色胺能神經元通過權利要求2所述的方法獲得，其具有下組的性能或特征：呈現成熟的電生理特性，產生復雜的神經元形態和電生理特性。

10.權利要求8或9所述的五羥色胺能神經元培養物或分離純化的五羥色胺能神經元的用途，用于：

制備預防、改善或治療神經系統疾病的藥物；或

用于作為體外模型，進行神經系統疾病的模擬及其藥物的篩選；或

用于制備體內細胞移植的組合物。