[發明專利]用于穿山甲親子鑒定的SSR熒光標記引物及應用

有效

• 申請號: 201811220793.2
• 申請日: 2018-10-19
• 公開（公告）號: CN109182546B
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 陳金平;李慧明;李林妙;晉學君
• 申請（專利權）人: 廣東省科學院動物研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

1.用于穿山甲親子鑒定的SSR熒光標記引物，其特征在于，所述引物為：

M13MJ-F2 F: TTTCATACCGGGAAGTCCAC; R: ATGGTCCTAACACCACGGAG；

M13MJ-F3 F: CACCTGCATGTACCCCTTTT; R: CCCCCTCAAAATACCACCTT；

M13MJ-F4 F: GAGAGAAAGGGGAAAATCGG; R: TGATAGGATGTGAGGAGGGG；

M13MJ-F5 F: TGGGGTCTGCTGTTTTCATT; R: CTCCCTCTGTAGGTTGCCCT；

M13MJ-F7 F: AGAAGTGATTTGCACCCCTG; R: CAGTGGCCAGAATGGAGATT；

M13MJ-F8 F: GTCATGCATGGAAGACAGGA; R: GTCTGGCTGAAATGGAAAGG；

M13MJ-F9 F: CCCTATGAGGTGGGCACTAA; R: AACTCCATCAAAGGTGTGGC；

M13MJ-F10 F: CCCAGATCCAAAATGAATGG; R: TGCTGATGTTCACTCTTGCC；

M13MJ-F11 F: ATCCACCTAGGAACCTCAGC; R: GACTCTTCGGGATTTCACACA；

M13MJ-F12 F: ATCCACCTAGGAACCTCAGC; R: GACTCTTCGGGATTTCACACA；

M13MJ-F16 F: TTCCCTTCATCTGTTTTGCC; R: CAGCACTGCCAAGGTCTGTA；

M13MJ-F17 F: GTAATGGGGTATGTGGTGGG; R: TCCCTGTTCAAACGGAATTT；

M13MJ-F20 F: CAGTGCTCATCACATAGCAGG; R: CATGCCTAGTGTTTCACGTTG

M13MJ-F24 F: TTCAGCCAGGGTCTCTCAGT; R: TGGGGTTTTTCCTCAATCTG；

M13MJ-F25 F: CCAGAGAAAGGTAGGAGCCA; R: TCCAGAAAACAGACCCAAGG。

2.權利要求1所述的引物在穿山甲親子鑒定中的應用。

3.權利要求1所述的引物在制備穿山甲親子鑒定試劑盒中的應用。

4.一種穿山甲親子鑒定的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、合成權利要求1引物對正向5’端加M13接頭的正向引物，所述的M13接頭序列為CACGACGTTGTAAAACGAC；合成通用引物M13的正向5’端添加熒光基團的正向引物；所述的通用引物M13的正向引物序列為CACGACGTTGTAAAACGAC；

B、提取穿山甲DNA作為模板，使用權利要求1引物對正向5’端加M13接頭的正向引物、反向引物、通用引物M13的正向5’端添加熒光基團的正向引物，進行PCR擴增，對PCR產物進行基因型判定，采用Cervus軟件計算等位基因數，觀測雜合度與期望雜合度，哈迪溫伯格平衡檢驗，多態信息含量、單獨排除率和累積排除率，根據基因型分析結果聯合使用排除法與似然法進行親子關系的鑒定。

5. 根據權利要求4所述的穿山甲親子鑒定的方法，其特征在于，所述的PCR擴增程序采用降落PCR，具體條件為：95 ℃預變性10 min；95 ℃變性15 s；退火溫度30 s從62至52 ℃，每2個循環降退火溫度2 ℃，72 ℃延伸2 min；95 ℃變性15 s；52 ℃退火溫度30 s；72 ℃延伸2 min；30個循環； 72 ℃延伸10 min。