[發明專利]一種基于愈傷組織分化的新疆野蘋果再生體系建立的方法

在審

• 申請號: 201811220216.3
• 申請日: 2018-10-19
• 公開（公告）號: CN109169287A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 張道遠;張燕;劉曉潔;李小雙;楊紅蘭
• 申請（專利權）人: 中國科學院新疆生態與地理研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務所(普通合伙) 65106
• 代理人: 張莉

1.一種基于愈傷組織分化的新疆野蘋果再生體系建立的方法，其特征在于：該方法以葉片為外植體，愈傷組織誘導及不定芽的誘導，不定芽的增殖，生根培養以及煉苗和移栽，具體操作按下列步驟進行：

愈傷組織及不定芽的誘導：

a、取實驗室繼代生長的新疆野蘋果無菌苗40d葉齡大小的幼嫩完全展開葉片為外植體，去掉葉柄部分，用解剖刀垂直于葉片中央葉脈橫切，將葉片等分為兩部分，以葉片遠軸端為接觸面，接種到誘導培養基中繼代2次，每25天一次，黑暗培養三周后，2000lx光照培養，光照時間16小時，培養溫度為24±2℃，培養7天后，肉眼可在切口處見黃色愈傷組織，20天左右在葉片切口處的愈傷組織看到有不定芽的分化，其中誘導培養基為以MS為基礎培養基，附加30g/L蔗糖，瓊脂6g/L，激素為NAA 0.0-2.0mg/L，TDZ 1.0-5.0mg/L或6-BA 1.0-5.0mg/L，滅菌前調pH至6.0，高溫高壓滅菌115℃，30分鐘；

不定芽的增殖：

b、將步驟a誘導出的不定芽切下，插到不定芽增殖培養基中，培養條件為黑暗培養三周后，2000lx光照培養，光照時間16小時，培養溫度為24±2℃，培養15天后長成1-4cm叢生芽或幼苗，增值倍數達3-5倍，其中不定芽增殖培養基為以MS為基礎培養基，附加30g/L蔗糖，瓊脂6g/L，激素為6-BA 0.4mg/L，NAA 0.0-0.1mg/L，滅菌前調pH至6.0，高溫高壓滅菌115℃，30分鐘；

生根培養：

c、將步驟b得到的3cm幼苗，沿莖基部切下，接種到生根培養基上，約10天可在莖基部看到粉紅色的根尖，25天可長出3-5條根，其中生根培養基為以1/2MS為基礎培養基，蔗糖15-30g//L，NAA 0.0-1.0mg/L，瓊脂6g/L，滅菌前調pH至6.0，高溫高壓滅菌115℃，30分鐘；

煉苗和移栽：

d、取株高5cm，有3-5條根的健壯幼苗移栽到已經濕潤的基質中，基質為營養土:蛭石3:1，將幼苗移栽進基質后，在移栽盆表面覆蓋扎有小洞的保鮮膜，期間每天向膜內噴水，光照強度減半，光照時間為16小時，培養溫度為24±2℃，7天后揭開保鮮膜呈半開狀態，正常光照下培養且仍需每天向膜內噴水，直至移栽后第一片新葉完全展開，即可完全撤去保鮮膜，此后恢復正常澆水。

2.根據權利要求1所述一種基于愈傷組織分化的新疆野蘋果再生體系建立的方法，其特征在于步驟a中誘導培養基中的激素為TDZ 4mg/L、NAA 1.0 mg/L。

3.根據權利要求1所述一種基于愈傷組織分化的新疆野蘋果再生體系建立的方法，其特征在于步驟b中不定芽增殖培養基激素濃度為6-BA 0.4mg/L。

4.根據權利要求1所述一種基于愈傷組織分化的新疆野蘋果再生體系建立的方法，其特征在于步驟c中生根培養基為1/2MS+15g蔗糖+0.1mg/L NAA。