[發明專利]一種基于磁珠法陰性去除血尿白細胞富集上皮細胞的方法在審
| 申請號： | 201811214974.4 | 申請日： | 2018-10-18 |
| 公開（公告）號： | CN109294973A | 公開（公告）日： | 2019-02-01 |
| 發明（設計）人： | 曹友德;余秋波;李庭泓;湯紅宇 | 申請（專利權）人： | 重慶醫科大學 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;C12Q1/6841 |
| 代理公司： | 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包曉靜 |
| 地址： | 400016*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 白細胞富集 上皮細胞 磁珠法 陰性 血尿 去除 磁珠 膀胱癌 紅細胞裂解液 白細胞 技術檢測 臨床意義 脫落細胞 完整細胞 物理分離 細胞沉淀 靈敏度 上清液 采樣 孵育 混勻 尿液 吸出 磁場 接種 擴散 診斷 引入 | ||
【權利要求書】：
1.一種基于磁珠法陰性去除血尿白細胞上皮細胞富集的方法，其特征在于，所述基于磁珠法陰性去除血尿白細胞上皮細胞富集的方法加紅細胞裂解液，10分鐘；1500g離心，10分鐘，去上清液；細胞沉淀中加入CD45磁珠20微升，混勻，常溫孵育1小時；磁場下處理5分鐘，全部吸出液體到EP管中。
2.如權利要求1所述的基于磁珠法陰性去除血尿白細胞上皮細胞富集的方法，其特征在于，所述加紅細胞裂解液之前需要：標本采集，收集至少200ml血尿標本置于離心管中，標本體積較多可反復離心；收集細胞，1500rpm，離心10分鐘。
3.如權利要求1所述的基于磁珠法陰性去除血尿白細胞上皮細胞富集的方法，其特征在于，所述加紅細胞裂解液之后需要：
步驟一，對液體進行膠原酶消化，即去上清，加入5ml膠原酶B溶液，用力吹打懸浮細胞，37℃水浴溫育20-40分鐘；
步驟二，對液體進行1500rpm，離心10分鐘，并進行低滲；
步驟三，對細胞液體進行預固定，且1500rpm，離心10分鐘；
步驟四，對細胞液體進行固定處理；
步驟五，重復步驟二；
步驟六，制備并保存細胞懸液；
步驟七，制片并老化玻片；
步驟八，對玻片進行預處理；
步驟九，在玻片上對細胞進行變性雜交；
步驟十，對玻片進行洗滌；
步驟十一，對玻片進行復染；
步驟十二，在熒光顯微鏡下觀察FISH結果。
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