[發明專利]檢測DNA單堿基突變的DNA探針和方法

有效

• 申請號: 201811211147.X
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN109321650B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 楊斌;李葉;杜軍
• 申請（專利權）人: 湘潭大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6827
• 代理公司: 長沙新裕知識產權代理有限公司 43210
• 代理人: 周躍仁

1.檢測DNA單堿基突變的方法，其特征在于，檢測DNA單堿基突變的DNA探針包括9個DNA探針，分別為MB-7C1，序列如SEQ ID NO：1、2所示；MB-7A1，序列如SEQ ID NO：3、4所示；MB-7T1，序列如SEQ ID NO：5、6所示；MB-7G1，序列如SEQ ID NO：7、8所示；MB-7DC，序列如SEQID NO：9、10所示；MB-7IT，序列如SEQ ID NO：11、12所示；MB-7IA，序列如SEQ ID NO：13、14所示；MB-7IG，序列如SEQ ID NO：15、16所示；MB-7IC，序列如SEQ ID NO：17、18所示；包括：

S1配置緩沖溶液、DNA探針溶液及7Ff-3A和E-Q混合液；7Ff-3A序列如SEQ ID NO：19所示，E-Q序列如SEQ ID NO：20所示；將上述的9個DNA探針分別溶解制得所述DNA探針溶液；測定DNA探針溶液及7Ff-3A和E-Q混合液的濃度；

S2將步驟S1所述DNA探針溶液分別用緩沖溶液稀釋到0.1-10uM；在90-95度下煮沸退火1-10分鐘，冷卻至室溫；

S3識別不同DNA堿基突變：在步驟S2制得的DNA探針溶液中，分別加入突變目標物，恒溫反應；

S4步驟S3所得反應液中加入7Ff-3A和E-Q混合液反應；

S5結果分析：

(1)測定步驟S4所得混合物520nm處的熒光光譜強度；

(2)做出不同探針與突變目標物的對應表格，得到陣列式數據，采用SPSS9.0軟件中的因子分析功能，將陣列式數據導入到軟件中進行因子分析，將不同突變目標物的熒光探針響應數據的因子得分，進行對比，得到最終的區分結果：以95％的置信區間為判定依據，如果不同的樣品屬于一個置信橢圓內，則認定為同一突變類型；所述突變目標物包括：T-7G，序列如SEQ ID NO：21所示；T-7T，序列如SEQ ID NO：22所示；T-7A，序列如SEQ ID NO：23所示；T-7C，序列如SEQ ID NO：24所示；T-7IA，序列如SEQ ID NO：25所示；T-7IT，序列如SEQID NO：26所示；T-7IC，序列如SEQ ID NO：27所示；T-7IG，序列如SEQ ID NO：28所示；T-7D，序列如SEQ ID NO：29所示。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1中，按照摩爾比1：1-10的比例混合7Ff-3A和E-Q。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S4中，S3所得反應液與7Ff-3A和E-Q混合液摩爾配比為10-200:10-500，反應時間為30-200分鐘，反應溫度為10-40度。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1中，所述緩沖溶液為：Tris-Mg，NaCl：pH＝7-8，Na⁺濃度為10-500mM，Mg²⁺濃度為1-20mM。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1中，采用紫外吸光光度計測定溶液在260nm處的紫外吸收值A，計算濃度：濃度c＝A/吸光系數。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S3中，DNA探針與突變目標物的摩爾比為10-500：10-500。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S3中，DNA探針溶液中分別加入突變目標物，在10-40度水浴鍋下反應30-200分鐘。