[發明專利]DRC3f抗原多肽，抗DRC3f的多克隆抗體及應用

在審

• 申請號: 201811209611.1
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN109293762A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 向陽;袁林;夏燕;陳安平;蘇林沖;向詩非;龔書識;馮佳;趙小丹;田瑞;楊年安
• 申請（專利權）人: 湖北民族學院
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C07K19/00
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230
• 代理人: 包曉靜

本發明屬于含有抗原或抗體的醫藥配制品技術領域，公開了一種DRC3f抗原多肽，抗DRC3f的多克隆抗體及應用；對DRC3f蛋白氨基酸序列的二級結構、免疫原性、親疏水性、表面可及性等進行分析，確定合適的一段肽序列進行人工合成；將合成的多肽與馬來酰亞氨活化的載體KLH、BSA偶聯，將此偶聯產物進行脫鹽柱純化后免疫bal/c小鼠；經過多次免疫的小鼠血清用ELISA法對抗體效價進行檢測，效價達理想值后收集免疫小鼠血清，并用Protein G蛋白純化柱純化抗體；對純化后抗體進行ELISA、western bot等鑒定。鑒定結果表明該多克隆抗體可特異性識別DRC3f蛋白。

技術領域

本發明屬于含有抗原或抗體的醫藥配制品技術領域，尤其涉及一種DRC3f抗原多肽，抗DRC3f的多克隆抗體及應用。

背景技術

補體C3是人體內補體系統中含量最高的分子，同時也是補體系統的關鍵分子。在補體激活過程中，三條補體激活途徑都需要通過活化C3形成C5活化酶。C3的活化形成C3b，則可通過CR1或H因子幫助下由I因子分解為滅活的iC3b和17肽C3f。后者在羧基肽酶-N作用下脫精氨酸，迅速生成16肽DRC3f。越來越多研究認為，DRC3f具有重要的生理功能：我們在前期研究中發現DRC3f在SSc患者血清中含量明顯增加，并且與SSc疾病活動度相關；李曼等研究認為DRC3f可能是重度肝炎的生物標志物；C3f和DRC3f還能夠提高血管內皮細胞通透性，二者的核心分子HWESAS還具有類生長激素樣作用。由于DRC3f分子量小，檢測方法受限，現階段市面上也未有抗體銷售，目前，主要是應用基質輔助激光解吸離子化飛行時間質譜(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of flight massspectrometry，MALDI-TOF MS)檢測血清中DRC3f的含量，其具體方法是:首先分離用成套試劑購自德國Bruker Daltonics公司，具體為:將磁珠加入磁珠結合緩沖液中混勻，之后加入血清混勻并靜置。將樣品管放入磁珠分離器使磁珠貼壁，棄懸浮液，用磁珠清洗緩沖液清洗兩次。樣品管中加入磁珠洗脫緩沖液，洗脫后的上清液移入新的樣品管，與磁珠穩定緩沖液吹打混勻后即可進行質譜分析。點靶時1u L的標準品與10u L基質混合后取1u L，點在600um Anchorchip標準品位置上，室溫干燥后將Anchorchip靶放入質譜，選擇模式:LP-Clinprot，采集范圍:相對分子量1000～12000Da。

綜上所述，現有技術存在的問題是：基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF MS)大多數實驗室未購置，且儀器價格貴，其次實驗中使用磁珠耗材費用貴，實驗操作復雜，預處理耗時長且對樣本純度要求高。

解決上述技術問題的難度和意義：DRC3f分子量小只有16個多肽組成，由于沒有針對該多肽的特異性抗體，現階段只能通過基質輔助激光解吸離子化飛行時間質譜進行檢查，限制了對DRC3f的功能研究。因此，積極尋找新的靈敏度高，特異性高的檢測方法對于研究DRC3f多肽的功能及其重要，但是由于DRC3f分子量小，免疫原性一般，由于DRC3f分子量小，免疫原性一般，因此，我們通過將其與KLH耦聯后免疫小鼠，以DRC3f為抗原包被96孔板，檢測發現，產生了特異性的抗DRC3f的抗體。同時，我們通過WB檢查發現，該抗體能夠特異性的識別KLH耦聯的DRC3f，但是卻不能檢查大鼠肝臟組織中補體C3的表達，提示該抗體具有較強的特異性，可以用于DRC3f功能研究。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種DRC3f抗原多肽，抗DRC3f的多克隆抗體及應用。

本發明是這樣實現的，一種DRC3f抗原多肽，所述DRC3f抗原多肽的氨基酸序列為SEQ ID NO：1。

本發明的另一目的在于提供一種由所述DRC3f抗原多肽為免疫原為抗原免疫免疫balb/c小鼠得到的多克隆抗體。