[發明專利]一種增強型ECL化學發光試劑

在審

• 申請號: 201811209166.9
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN109444116A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 江斌
• 申請（專利權）人: 江西中洪博元生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/535
• 代理公司: 蘇州中合知識產權代理事務所(普通合伙) 32266
• 代理人: 龍濤

本發明公開了一種增強型ECL化學發光試劑，該試劑具有優化的配方，可在Western Blot和ELISA實驗中與辣根過氧化物酶(HRP)配套使用，兼容膠片曝光和CCD掃描，靈敏度高，能檢測pg級別的抗原，且能夠增強發光強度，抗淬滅能力強，結果穩定，成像效果明顯。

技術領域

本發明屬于免疫檢測技術領域，涉及一種增強型ECL化學發光試劑。

背景技術

研究機體組織或細胞中某一蛋白質表達水平是否發生變化，幾乎都需要使用蛋白質免疫印跡(Western Blot)方法來檢測，免疫印跡最后也是最重要一步就是酶標抗體與底物反應釋放信號。其中較為簡單也為大家所普遍接受的Western blot顯色方法為底物化學發光法ECL。

Western Blot中常用的ECL系列產品，是用于檢測免疫印跡過程中辣根過氧化物酶(HRP)標記抗體的化學發光底物。HRP酶體系具有高轉換系數、對不同靈敏度分析系統具有通用性而受到廣泛應用。目前，HRP酶體系最常用的發光底物是魯米諾、異魯米諾及其衍生物，將等體積的兩種溶液進行混合，與印跡的膜進行孵育，隨后即可使用膠片或者成像系統檢測結果。其基本檢測過程包括：蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上，以辣根過氧化物酶HRP標記的抗體結合膜上的目的蛋白，或以HRP標記的探針直接或間接結合膜上的核酸，洗膜后用配制的ECL化學發光工作液，在可見光下室溫孵育數分鐘，將印跡膜用保鮮膜包被固定于X光片曝光暗盒，然后轉入暗室將膠片壓在膜上曝光數秒至數小時。顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X光片上。也可不進行膠片曝光，直接對印跡膜進行CCD掃描。

然而，魯米諾體系的發光為閃光型、強度弱、持續時間短，發光效率并不高。采用魯米諾體系標記的化學發光免疫檢測常常面臨以下問題：1、western顯影效果不佳；2、發光強度不高；3、容易形成淬滅。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種靈敏度高的增強型ECL化學發光試劑，該試劑可在Western Blot和ELISA實驗中與辣根過氧化物酶(HRP)配套使用，發光強度高，顯影效果好且不易淬滅，能檢測pg級別的抗原。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種增強型ECL化學發光試劑，包括組分1和組分2，其中：

組分1又包括：

組分2又包括：

Tris-HCl緩沖液，pH 8.0-9.0 0.1-0.3M

30％-50％雙氧水 體積分數0.04％-3％。

優選地，所述魯米諾衍生物為魯米諾鈉鹽、異魯米諾或4-氨基已基-N-乙基異魯諾。

優選地，組分1和組分2中，Tris-HCl緩沖液的pH均為9.0。

優選地，組分1和組分2的體積比為1：1-2：1。

優選地，組分1中，所述魯米諾為溶于二甲基亞砜配制而成的魯米諾質量濃度為60-120mg/ml的魯米諾溶液，所述對香豆酸為采用pH為9.0的0.1M Tris-HCl緩沖液配制而成的對香豆酸摩爾濃度為5-8mM的對香豆酸溶液。

優選地，組分1包括：

組分2包括：

0.1-0.3M Tris-HCl緩沖液，pH 9.0 20-200ml

30％-50％雙氧水 0.1-0.6ml。

優選地，組分1和組分2的體積比為2：1。