[發明專利]一種嗜酸粒細胞性支氣管炎小鼠模型的建立和檢測方法

有效

• 申請號: 201811207445.1
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN109350737B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 陳莉延;何耀為;賴克方;鐘南山;唐瑞娣;唐婷婷;黃卓漢;蘇曦;嚴梓健;趙華嗣
• 申請（專利權）人: 廣州醫科大學附屬第一醫院;廣州呼吸健康研究院
• 主分類號: A61K38/38
• 分類號: A61K38/38;A61K31/165;A01K67/027;G16H50/50
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 劉瑜

1.一種嗜酸粒細胞性支氣管炎小鼠模型的建立和檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將小鼠通過OVA致敏以及激發，建立嗜酸粒細胞性支氣管炎小鼠模型；

(2)將步驟(1)中獲得的小鼠置于Buxco無創肺功能檢測系統的密閉體描艙內自由活動；其中，Buxco無創肺功能檢測系統連接有霧化控制器和信號轉換器；

(3)使用乙酰甲膽堿霧化激發小鼠，并通過Finepointe軟件的氣道反應性模式測定小鼠霧化激發前后Penh值的變化來評價小鼠的氣道反應性；

所述的嗜酸粒細胞性支氣管炎小鼠模型的建立和檢測方法在步驟(2)之后、步驟(3)之前還包括咳嗽敏感性檢測的步驟，具體為：

使用辣椒素激發液霧化激發小鼠咳嗽，實時監聽小鼠咳嗽聲音，通過聲音分析軟件記錄聲波，并通過Finepointe軟件將艙內氣流變化轉化為呼吸波形進行記錄并自動實時分析、計數，以檢測小鼠的咳嗽敏感性；

步驟(1)中所述的嗜酸粒細胞性支氣管炎小鼠通過激素治療后癥狀緩解；

所述的激素為地塞米松；

步驟(1)中所述的小鼠為雌性Balb/c小鼠，其年齡為7～8周齡，體重為18～20g，動物級別為SPF級；

步驟(1)中所述的氣道反應性的檢測為在咳嗽敏感性檢測6小時后進行。

2.根據權利要求1中所述的嗜酸粒細胞性支氣管炎小鼠模型的建立和檢測方法，其特征在于，步驟(1)中所述的激發通過如下步驟實現：將小鼠麻醉后用含有10μg OVA的OVA溶液滴鼻激發；

所述的OVA溶液通過如下方法配制得到：將OVA粉末溶解到生理鹽水中，得到OVA溶液；其中，OVA粉末的用量按每毫克OVA粉末配比5ml生理鹽水計算。

3.根據權利要求1中所述的嗜酸粒細胞性支氣管炎小鼠模型的建立和檢測方法，其特征在于，步驟(1)中所述的致敏通過如下步驟實現：小鼠在第0天、第7天和第14天腹腔注射含有10μg OVA和1.3mg佐劑氫氧化鋁的OVA溶液使小鼠致敏；

所述的OVA溶液通過如下方法配制得到：

(I)將OVA粉末溶解到生理鹽水中，得到混合液A；其中，混合液A的濃度為2mg/ml；

(II)將混合液A與生理鹽水按體積比1:19混合均勻，得到混合液B；

(III)將混合液B與佐劑氫氧化鋁凝膠按體積比1：1混合均勻，得到混合液C；其中，佐劑氫氧化鋁凝膠的濃度為13mg/ml；

(IV)將混合液C在4℃條件下放置1h，得到OVA溶液。

4.根據權利要求1中所述的嗜酸粒細胞性支氣管炎小鼠模型的建立和檢測方法，其特征在于：

步驟(3)所述的使用乙酰甲膽堿霧化激發為依次使用濃度為3.125mg/ml、6.25mg/ml、12.5mg/ml、25mg/ml和50mg/ml的乙酰甲膽堿霧化激發，每次霧化1min，記錄3min，乙酰甲膽堿經霧化后進入體描艙內，由小鼠通過自主呼吸吸入。

5.根據權利要求1中所述的嗜酸粒細胞性支氣管炎小鼠模型的建立和檢測方法，其特征在于：

所述的辣椒素激發液的濃度為100μmol/L，霧化劑量為1.0ml/3min；

所述的聲音分析軟件為cooledit軟件。

6.根據權利要求1中所述的嗜酸粒細胞性支氣管炎小鼠模型的建立和檢測方法，其特征在于：

所述的辣椒素激發液由以下步驟配制而成：先將30.5mg的辣椒素，1ml的吐溫80，1ml的無水乙醇和8ml的生理鹽水混合均勻，得到原液；再取出0.5ml的原液與49.5ml的生理鹽水混合均勻，得到辣椒素激發液。