[發明專利]一種畜肉中左旋咪唑含量的檢測方法

在審

• 申請號: 201811207412.7
• 申請日: 2018-10-17
• 公開（公告）號: CN108956841A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 吳少明;蔡小明;楊旺火;梁敏;陳言凱;李燕平
• 申請（專利權）人: 福建省產品質量檢驗研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種畜肉中左旋咪唑含量的檢測方法, 其特征在于,所述的畜肉中左旋咪唑含量的檢測方法,包括以下步驟：

（一）待測物質的提取:

稱取待測均勻樣品2.0g于50mL聚丙烯塑料離心管中，加入40μL內標（100ng/mL），再加入10mL乙腈，于30℃水浴下超聲提取30 min。提取結束后， 4500 轉/min的轉速離心5 min;

（二）提取液的凈化:

取步驟（一）離心后所得上層提取液5 mL過活化后的HLB固相萃取柱凈化（分別用3.0mL乙腈、3mL超純水活化），收集流出液與5mL玻璃試管中;

（三）提取液的濃縮:

將步驟（二）所收集的洗脫液于45℃水浴下氮吹至近干，加入10%乙腈含0.2%甲酸溶液溶解定容至1.0mL，渦旋混勻后過0.22μm濾膜，UPLC-MS-MS分析測試;

（四）儀器條件:

色譜柱： BEH C₁₈柱（150 mm×2.1 mm，1.7μm，Waters公司）；柱溫：40℃；流速為0.3 mL/min；流動相為(A)0.3%甲酸；(B)乙腈；進樣方式：梯度洗脫，梯度洗脫程序如表1所示。進樣體積：2.0μm;

質譜參數：電噴霧電離負離子模式（ESI-）；毛細管電壓：3000 V；干燥氣溫度：160℃；干燥氣流速：16L/min；霧化氣壓力：30 psi；鞘氣溫度：350 ℃；鞘氣流速：12 L/min；掃描模式：多反應監測（MRM）；

（五）所述的左旋咪唑結構為,分子量為204.29，CAS號為：14769-73-4;

（六）標準曲線的制備:

分別準確稱取適量左旋咪唑標準品和內標于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解后定容至刻度，充分混勻得到標準儲備液，于-18℃冰箱中放置保存。以標準儲備液配制出100ng/mL 的中間液和內標中間液，再分別取適量中間液及內標中間液以10%乙腈含0.2%甲酸稀釋成1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL的標準曲線系列，內標濃度均為2.0ng/mL，按照步驟（四）進樣分析;

（七）定量方法

UPLC-MS-MS進樣分析后，以標準曲線溶液中左旋咪唑的峰面積與其內標的比值為Y值，濃度為X（ng/mL）值，進行標準曲線擬合，得出各物質標準曲線Y=AX+B；樣品的測定結果按式（1）計算：

w = -------------------------------------------------（1）

式中：

w ──樣品中左旋咪唑的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

──標準曲線計算出的樣品的濃度（ng/mL）；

V ──樣品的定容體積，單位為毫升（mL）；

──稀釋倍數；

m ──樣品稱樣量，單位為克（g）。

2.豬肉中左旋咪唑含量的檢測方法, 其特征在于,豬肉中左旋咪唑含量的檢測方法包括如下步驟:

（一）樣品的制備

取豬肉樣品約500g，全部轉移至高速粉碎機中，蓋緊粉碎機蓋子，以10000 轉/min的轉速粉碎,樣品在-18攝氏度冷凍保存，備用;

（二）待測物質的提取

稱取待測均勻樣品2.0g于50mL聚丙烯塑料離心管中，加入40μL內標（100ng/mL），再加入10mL乙腈，于30℃水浴下超聲提取30 min。提取結束后， 4500 轉/min的轉速離心5 min;

（三）提取液的凈化

取步驟（一）離心后所得上層提取液5 mL過活化后的HLB固相萃取柱凈化（分別用3.0mL乙腈、3mL超純水活化），收集流出液與5mL玻璃試管中;

（四）提取液的濃縮

將步驟（二）所收集的洗脫液于45℃水浴下平行濃縮儀濃縮至近干，加入10%乙腈含0.2%甲酸溶液溶解定容至1.0mL，渦旋混勻后過0.22μm濾膜，UPLC-MS-MS分析測試;

（五）儀器條件

色譜柱： BEH C₁₈柱（150 mm×2.1 mm，1.7μm，Waters公司）；柱溫：40℃；流速為0.3 mL/min；流動相為(A)0.3%甲酸；(B)乙腈；進樣方式：梯度洗脫，梯度洗脫程序如表3所示。進樣體積：2.0μm;

質譜參數：電噴霧電離負離子模式（ESI-）；毛細管電壓：3000 V；干燥氣溫度：160℃；干燥氣流速：16L/min；霧化氣壓力：30 psi；鞘氣溫度：350 ℃；鞘氣流速：12 L/min；掃描模式：多反應監測（MRM）；

（六）標準曲線的制備

分別準確稱取適量左旋咪唑標準品和內標于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解后定容至刻度，充分混勻得到標準儲備液，于-18℃冰箱中放置保存。以標準儲備液配制出100ng/mL 的中間液和內標中間液，再分別取適量中間液及內標中間液以10%乙腈含0.2%甲酸稀釋成1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL的標準曲線系列，內標濃度均為2.0ng/mL，按照步驟（四）進樣分析;

（七）定量方法

UPLC-MS-MS進樣分析后，以標準曲線溶液中左旋咪唑的峰面積與其內標峰面積的比值為Y值，濃度為X（ng/mL）值，進行標準曲線擬合，得出各物質標準曲線Y=AX+B；樣品的測定結果按式（1）計算:

w = -------------------------------------------------（1）

式中：

w ──樣品中左旋咪唑的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

──標準曲線計算出的樣品的濃度（ng/mL）；

V ──樣品的定容體積，單位為毫升（mL）；

──稀釋倍數；

m ──樣品稱樣量，單位為克（g）。