[發明專利]PKD2重組過表達載體及其構建方法和用途

有效

• 申請號: 201811203677.X
• 申請日: 2018-10-16
• 公開（公告）號: CN109321602B
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 陳意雄;蔡曉龍;鄒杰;朱鵬飛;白易鑫
• 申請（專利權）人: 漢恒生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864;C12N5/10;C12N15/66;A61K48/00;A61K38/17;A61P9/10
• 代理公司: 常州市權航專利代理有限公司 32280
• 代理人: 黃晶晶

本發明提供一種PKD2重組過表達載體及其構建方法和用途，所PKD2重組過表達載體是將目的基因PKD2插入腺相關病毒載體獲得，所述腺相關病毒載體至少包括如下可操作性連接的序列元件：EF1啟動子，MCS區，CMV啟動子序列，EGFP基因序列。PKD2重組過表達載體可以高效的表達PKD2。經過發明人深入的研究，意外地發現，PKD2重組過表達載體可以緩解小鼠心梗癥狀。在心梗小鼠體內注射攜帶有該基因的腺相關病毒，能夠有效恢復小鼠心臟功能，心肌梗死面積明顯降低，說明本發明的技術方案適用于心梗治療。

技術領域

本發明涉及一種PKD2重組過表達載體及其構建方法和用途，屬于生物技術領域。

背景技術

PKD2的基因標準參照序列為GeneBank NM_000297.3，PKD2位于人4q21-23，基因長68kb，含15個外顯子，編碼區長度2907bp。

我國心血管疾病患病率處于持續上升階段，每年有約200萬新發心肌梗死患者，并以每年10.42％的速度遞增，成為導致心力衰竭和心血管病總死亡率上升的主要原因和嚴重危害國人健康的難治性疾病之一本領域技術人員一直致力于開發能夠有效治療或預防心梗的技術。現有技術中的問題是缺少可以有效治療、預防心梗的手段和方法。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種PKD2重組過表達載體及其構建方法和用途，本發明所要解決的技術問題是提供一種可以顯著改善心梗的腺相關病毒載體。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供一種AQP5重組過表達載體，所述AQP5重組載體通過將目的基因AQP5插入腺相關病毒載體獲得，所述腺相關病毒載體至少包括如下可操作性連接的序列元件：

5’末端反相重復序列，TBG啟動子序列，MCS區，P2A序列，ZsGreen基因序列，3’末端反相重復序列。

腺相關病毒是一種單鏈無包膜DNA病毒。它通過受體介導的內吞作用進入細胞內，然后腺相關病毒基因組轉移至細胞核內，保持在染色體外，不整合進入宿主細胞基因組中。

PKD2基因在NCBI中的登錄號為5311。

本發明利用天然的腺相關病毒經過基因改造后獲得一種轉重組過表達載體。

所述的“操作性連接”或“可操作性連接”是指兩個或者多個核酸區域或核酸序列的功能性空間排列。例如，啟動子區被置于相對于目的基因核酸序列的特定位置，使得核酸序列的轉錄受到該啟動子的引導，從而，啟動子區域可被“可操作性連接”到核酸序列上。

所述的“元件”是指一些對于蛋白的表達有用的一些列功能性核酸序列，本發明中，所述的“元件”被系統地構建以形成一種表達構建體。所述的“元件”序列是可以本發明中提供的，也包括他們的變體，只要這些元件上保留了所述“元件”的功能，其通過插入或者刪除一些堿基，或者隨機或定點突變等來獲得。

所述各個元件的上游及下游位置，還可包括限制性內切酶的酶切位點，這些位點有利于各個元件的有機連接。

進一步地，所述AQP5重組過表達載體序列如SEQ ID NO.1所示，具體如下：