[發明專利]一種酶法修飾提高猴頭菇多糖生物活性的方法

在審

• 申請號: 201811197925.4
• 申請日: 2018-10-15
• 公開（公告）號: CN109182420A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 秦韜;黃一帆;任喆;劉曉盼;李健;馬玉芳;黃小紅;俞道進
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12P19/14
• 分類號: C12P19/14;C12P19/04
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明提供一種酶法修飾提高猴頭菇多糖生物活性的方法，分別采用α?淀粉酶、內切?1,4?β?甘露聚糖酶、內切?1,4?β?半乳糖酶、內切?1,5?α?阿拉伯聚糖酶對猴頭菇多糖進行修飾。此種酶解多糖的方法可顯著增強猴頭菇多糖的免疫活性，使RAW264.7的吞噬能力顯著增加，免疫因子CD86、CD11b的含量顯著升高；小鼠灌服酶解多糖后，脾臟和胸腺指數顯著增加，淋巴細胞明顯增殖，腸粘膜sIg A、IL?4和TNF?γ含量明顯提高。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種酶法修飾提高猴頭菇多糖生物活性的方法。

背景技術

研究發現，猴頭菇多糖在降血壓、抗腫瘤、降血脂、抗氧化、抗輻射、抗潰瘍、抗衰老以及提高機體免疫力上有很好的效果，但其分子量和粒徑比較大，影響機體對它的利用，可通過修飾方法增強其原有的生物活性。本文采用酶降解多糖的方法修飾猴頭菇多糖，此法具有專一性強，高效節能，安全無污染的特點。

目前，酶降解多糖的研究中，所選用的修飾酶是纖維素酶，α-淀粉酶，半纖維素酶和果膠酶等，原因是植物細胞中，淀粉、纖維素、果膠是植物中含有單獨存在的多糖。（淀粉是植物體內儲存能量的一種方式，纖維素，果膠是植物細胞壁的重要組成成分）。而本文的研究中，在確認選用哪一種降解酶之前，先用氣相色譜法測出猴頭菇多糖內含有的單糖成分，然后根據猴頭菇多糖的單糖組成選定相對應的酶，進行酶解反應。另外，雖然有酶降解多糖的研究，但有關酶修飾猴頭菇多糖的研究報道還未曾出現，所以本實驗將做有關酶降解猴頭菇多糖的一系列實驗，并證明酶解產物的生物活性有著顯著地增長。

發明內容

本發明的目的在于提供一種酶法修飾提高猴頭菇多糖生物活性的方法。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種酶法修飾提高猴頭菇多糖生物活性的方法，包括以下步驟：

用磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉溶于雙蒸水，調pH為4.0-7.0，獲得含2.8wt.%磷酸氫二鈉和3 wt.%磷酸二氫鈉的緩沖液；精確稱取猴頭菇多糖36 mg，用緩沖液配置成4 mg/mL溶液；取45 μL酶用855 μL、pH值為4.0-7.0緩沖液稀釋成酶溶液；將多糖溶液和酶溶液混合，分別在40-75℃水浴鍋中反應1 h，然后沸水浴10 min；冷卻1 h，離心3000 r/min，10 min，取上清液，冷凍干燥后保存。

用Sevage法去除殘留的蛋白質，透析袋透析24 h，取出透析液，再加入3倍重量的工業乙醇進行醇沉1-2 d，然后收集沉淀，離心6000 rpm 20 min，冷凍干燥后保存。

所述酶為5 wt.%的α-淀粉酶、內切-1,4-β-甘露聚糖酶、內切-1,4-β-半乳糖酶、內切-1,5-α-阿拉伯聚糖酶溶液。

本發明的優點在于：

1. 酶法修飾多糖的研究中，所選用的修飾酶是纖維素酶，α-淀粉酶，半纖維素酶和果膠酶，很少用其它的酶。本方案除了α-淀粉酶，還有內切-1,4-β-甘露聚糖酶、內切-1,4-β-半乳糖酶、內切-1,5-α-阿拉伯聚糖酶用來修飾多糖。

2. 酶解修飾后，多糖溶液中有很多沉淀，這些雜質可能有很大的影響。本方案用了Sevage法去除殘留的蛋白質，透析，醇沉，離心，冷凍干燥等方法有效去除雜質。

3. 酶解時，需要在一定溫度下反應12 h，所用的時間很長。本方案是酶在最適溫度和最適pH值的條件下，與多糖反應1 h，這樣可減少大量的時間。

具體實施方式

實施例1